摘要目的:探讨膝痹宁Ⅱ干预小鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)寒湿痹阻证的效果及作用机制.方法:将40只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、膝痹宁Ⅱ组、蠲痹汤组,每组10只.模型组、膝痹宁Ⅱ组、蠲痹汤组小鼠均行半月板失稳术,并在术后将小鼠置于人工气候箱(湿度60％、温度4℃、风速6 m·s-1)中构建KOA寒湿痹阻证模型;假手术组仅切开膝关节处皮肤.造模成功后,膝痹宁Ⅱ组和蠲痹汤组小鼠分别用0.26 mL的膝痹宁Ⅱ药液(生药浓度1.0 g·mL-1)和0.26 mL的蠲痹汤药液(生药浓度1.9 g·mL-1)灌胃,假手术组和模型组小鼠均给予等量蒸馏水灌胃.每日给药1次,连续给药28 d.分别于造模开始前、造模结束后第7天及药物干预7 d、14 d、21 d、28 d,测定各组小鼠冷刺激缩足阈值和机械刺激缩足阈值.药物干预28 d后,采用ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1 β和IL-6的含量,分别采用HE染色、Masson染色、天狼星红染色观察小鼠膝关节滑膜组织病理变化,采用免疫荧光法检测小鼠L3～L5背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)组织中瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)、瞬时受体电位香草酸1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、瞬时受体电位褪黑素 8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)通道,采用Western Bolt 法检测 L3～L5 DRG 组织中 TRPA1、TRPV1、TRPM8、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的蛋白表达水平.结果:①小鼠冷刺激缩足阈值和机械刺激缩足阈值测定结果.造模结束后第7天,模型组、膝痹宁Ⅱ组、蠲痹汤组小鼠冷刺激缩足阈值、机械刺激缩足阈值均低于假手术组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),膝痹宁Ⅱ组、蠲痹汤组小鼠冷刺激缩足阈值、机械刺激缩足阈值与模型组的差异均无统计学意义(P=0.782,P=0.957;P=0.988,P=0.986),膝痹宁Ⅱ组小鼠冷刺激缩足阈值、机械刺激缩足阈值与蠲痹汤组的差异均无统计学意义(P=0.990,P=0.915);药物干预7 d、14 d、21 d、28 d,模型组小鼠冷刺激缩足阈值、机械刺激缩足阈值均低于假手术组、膝痹宁 Ⅱ 组、蠲痹汤组(干预 7 d:P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000.干预 14 d:P=0.000,P=0.005,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000.干预 21 d:P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000.干预28 d:P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),膝痹宁Ⅱ组小鼠冷刺激缩足阈值、机械刺激缩足阈值与蠲痹汤组的差异均无统计学意义(干预7 d:P=0.714,P=0.767;干预14 d:P=0.781,P=0.997;干预21 d:P=0.994,P=0.762;干预28 d:P=0.892,P=0.961).②小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量测定结果.模型组小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均高于假手术组、膝痹宁 Ⅱ 组、蠲痹汤组(TNF-α:P=0.000,P=0.000,P=0.000;IL-6:P=0.000,P=0.000,P=0.000;IL-1 β:P=0.000,P=0.000,P=0.000),膝痹宁Ⅱ组小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量与蠲痹汤组的差异均无统计学意义(P=0.996,P=0.950,P=0.799).③小鼠膝关节滑膜组织病理学观察结果.HE染色显示,模型组滑膜细胞排列紊乱,炎性浸润明显;膝痹宁Ⅱ组、蠲痹汤组滑膜细胞排列较整齐,滑膜结构趋于正常,炎性浸润明显减少.Masson染色显示,模型组滑膜胶原纤维排列紊乱,胶原纤维沉积增多;膝痹宁Ⅱ组、蠲痹汤组滑膜胶原纤维排列整齐,滑膜结构趋于正常,胶原纤维沉积明显减少.天狼星红染色显示,模型组Ⅱ型胶原减少,胶原纤维排列紊乱;膝痹宁Ⅱ组、蠲痹汤组Ⅱ型胶原增多,胶原纤维排列较整齐.④小鼠L3～L5DRG组织中TRPA1、TRPV1、TRPM8通道检测结果.免疫荧光染色显示,假手术组TRPA1、TRPV1、TRPM8荧光强度最弱,模型组荧光强度最强,膝痹宁Ⅱ和蠲痹汤组荧光强度较模型组减弱.⑤小鼠L3～L5DRG组织中TRPA1、TRPM8、TRPV1、NGF、CGRP的蛋白表达水平检测结果.模型组小鼠L3～L5DRG组织中TRPA1、TRPM8、TRPV1、NGF、CGRP的蛋白相对表达量均高于假手术组、膝痹宁 Ⅱ 组、蠲痹汤组(TRPA1:P=0.000,P=0.000,P=0.000;TRPM8:P=0.000,P=0.000,P=0.000;TRPV1:P=0.000,P=0.000,P=0.000;NGF:P=0.000,P=0.000,P=0.000;CGRP:P=0.000,P=0.000,P=0.000),膝痹宁 Ⅱ 组 TRPA1、TRPM8、TRPV1、NGF、CGRP的蛋白相对表达量与蠲痹汤组的差异均无统计学意义(P=0.939,P=0.998,P=0.981,P=0.961,P=0.794).结论:膝痹宁Ⅱ能够减轻KOA寒湿痹阻证模型小鼠痛觉敏化和滑膜炎症,疗效与蠲痹汤相当,其作用机制可能与其能抑制DRG组织中TRP通道激活有关.