补中愈淋汤对复发性尿路感染模型小鼠膀胱黏膜屏障及膀胱上皮细胞载菌量的影响
Effects of Buzhong Yulin Decoction(补中愈淋汤)for Mice with Recurrent Urinary Tract Infectionon on Bladder Mucosal Barrier and Bacterial Load of Bladder Epithelial Cells
摘要目的 探讨补中愈淋汤防治复发性尿路感染的可能作用机制.方法 采用尿路致病性大肠杆菌(UPEC)UTI89菌株膀胱灌注法建立复发性尿路感染小鼠模型,造模成功小鼠随机分为模型组、抗生素组及补中愈淋汤低、高剂量组,每组6只.另取5只未造模的C57BL/6小鼠作为空白组.补中愈淋汤低、高剂量组分别予浓度为1.3、5.2 g/ml补中愈淋汤0.1 ml/10 g灌胃,抗生素组予5 mg/ml盐酸左氧氟沙星溶液0.1 ml/10g灌胃,空白组及模型组予蒸馏水0.1 ml/10 g灌胃.各组均每天灌胃1次,连续7天.采用尿斑实验观察小鼠尿斑总数、中心尿斑数及尿斑总尿量;HE染色观察小鼠膀胱组织病理学变化;ELISA法检测血清炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;扫描电镜观察膀胱上皮细胞形态;免疫荧光法检测膀胱组织抗尿路斑块蛋白3A(UroPlakin 3A)蛋白水平及UPEC载菌量;涂板法检测尿菌量及膀胱上皮细胞内细菌量;RT-PCR法检测膀胱组织Ras相关蛋白11A(RAB11A)、Ras相关蛋白27B(RAB27B)mRNA水平;免疫印迹法检测膀胱组织微管相关轻链蛋白3(LC3)、P62蛋白水平.结果 与空白组比较,模型组小鼠膀胱上皮细胞脱落,膀胱上皮细胞形态异常;膀胱上皮平均表面积减小,膀胱组织UroPlakin 3A蛋白及RAB11A、RAB27B mRNA水平降低;小鼠尿斑总数、中心尿斑数,膀胱组织UPEC载菌量,尿菌量,膀胱上皮细胞内细菌量,血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,膀胱组织LC3、P62蛋白水平均升高(P<0.05或P<0.01).与模型组比较,补中愈淋汤低、高剂量组小鼠膀胱上皮细胞层完整、上皮细胞形态规则;膀胱上皮细胞平均表面积增大,膀胱组织UroPlakin 3A蛋白及RAB11A、RAB27B mRNA水平升高;小鼠尿斑总数、中心尿斑数,膀胱组织UPEC载菌量,尿菌量,膀胱上皮细胞内细菌量,血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,膀胱组织P62蛋白均降低(P<0.05或P<0.01),LC3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).抗生素组膀胱上皮细胞部分缺失,上皮细胞形态异常.与抗生素组比较,补中愈淋汤低、高剂量组小鼠膀胱上皮细胞平均表面积增大,膀胱上皮细胞载菌量减少,膀胱组织P62蛋白水平降低(P<0.05).补中愈淋汤低、高剂量组组间比较,各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 补中愈淋汤可能通过修复膀胱黏膜屏障,提高膀胱组织RAB11A及RAB27B水平、增强自噬,促进膀胱上皮细胞内细菌清除,从而防治复发性尿路感染.
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