换一批萤火虫荧光素酶报告基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定
Construction of Recombinant Retroviral Vector Containing Firefly Luciferase Reporter Gene
摘要目的 构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础.方法 利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的 基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(fluc)SN在脂质体介导下"乒乓"转染GP+E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆.扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性.结果 经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP+E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶.结论 成功构建了重组质粒pL(fluc)SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法 和平台.
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DOI
10.3969/j.issn.1673-0364.2009.04.004
发布时间
2009-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30400182）
国家高技术研究发展计划（863计划）（863;2007AA02Z454）
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