换一批摘要目的 提高人皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblasts,hSFs)的获取效率,减少组织块的消耗、缩短细胞培养的周期.方法 使用改良组织块培养法(胰酶室温消化15 min+组织块培养)进行细胞培养,细胞传代后,使用重复贴壁法(再次将组织种植到新培养皿中)继续培养HSFs.将改良组织块培养法分离的细胞记为hSFs-1,第3、5次重复贴壁分离的细胞记为hSFs-3、hSFs-5,使用CCK-8检测hSFs-1、hSFs-3、hSFs-5的细胞增殖能力,细胞免疫荧光检测Vimentin表达,Western blot检测波形蛋白(Vimentin)的表达;将分离培养的第1、2、3、5代细胞分别记为P1、P2、P3、P5,Western blot检测P1、P2、P3、P5细胞中角蛋白5(Cytokeratin 5,CK5)的表达.结果 hSFs成功从组织块分离并传代,利用重复贴壁法仍能继续培养并分离出hSFs.hSFs-1、hSFs-3、hSFs-5细胞生长增殖能力无显著差异(P>0.05);hSFs-1、hSFs-3、hSFs-5组细胞Vimentin表达无显著差异(P>0.05);细胞免疫荧光显示hSFs细胞呈梭形或星型,均表达Vimentin.P3、P5细胞中CK5蛋白含量显著降低(P<0.05).结论 使用改良组织块培养后,继续重复贴壁法可连续培育出hSFs,且重复贴壁法与改良组织块培养法分离的细胞在细胞形态、增殖能力、蛋白表达方面上无显著差异;传代培养至3～5代后可显著纯化成纤维细胞.
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关键词
原代培养人皮肤成纤维细胞改良组织块培养重复贴壁法Primary cultureHuman skin fibroblastsModified explant culture methodRepeated adherence method
分类号
Q813.1+1（细胞工程）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-0364.2025.05.007
发布时间
2025-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
河北省在读研究生创新能力培养资助项目（CXZZSS2024121）
承德市应用技术研究与开发暨可持续发展议程创新示范区专项科技计划项目（202404B076）
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