摘要目的 探讨羽扇豆醇调节有丝分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mam-malian target of rapamycin,mTOR)信号通路对氧糖剥夺/复氧(Oxygen-glucose deprivation/Reoxygenation,OGD/R)诱导的神经元自噬的影响.方法 原代培养海马神经元,建立OGD/R损伤模型;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测不同水平羽扇豆醇(0、1、5、10、20、40、80μmol/L)干预的OGD/R海马神经元存活率;将大鼠海马神经元随机分为对照(CON)组(常规培养)、OGD/R组(氧糖剥夺90 min后复氧复糖24 h)、羽扇豆醇组(OGD/R+10μmol/L羽扇豆醇)、叔丁基对苯二酚(Tert-butylhydroquinone,TBHQ)组(OGD/R+10μmol/L羽扇豆醇+50μmol/L MAPK激活剂TBHQ);试剂盒检测神经元乳酸脱氢酶(Lactate de-hydrogenase,LDH)、丙二醛(Ma-londialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)及还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2′,7′-Dichlorohydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针法检测神经元活性氧(Reactive oxide species,ROS)水平;钙荧光探针(Fluo-3 acetoxymethyl ester,Fluo-3/AM)法检测神经元Ca2+水平;流式细胞术检测神经元凋亡情况;透射电镜观察神经元自噬情况;自噬双标记腺病毒(Red fluores-cent protein-gteen fluorescent protein-microtubule-associated protein 1 light chain 3,mRFP-GFP-LC3B)检测神经元自噬流;Western blot检测神经元微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3Ⅱ/Ⅰ,LC3Ⅱ/Ⅰ)、p62,Beclin 1,ERK1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(Phosphorylated extracellu-lar signal-regulated kinases 1/2,p-ERK1/2)、mTOR和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)蛋白表达水平.结果 与0μmol/L比较,5、10、20、40μmol/L羽扇豆醇均能提高神经元存活率(P＜0.05),但10μmol/L羽扇豆醇时神经元存活率最高;与CON组比较,OGD/R组神经元存活率、SOD,GSH以及p62和p-mTOR蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),LDH,MDA,ROS水平、Ca2+平均荧光强度、自噬小体个数、黄色荧光颗粒、红色荧光颗粒以及LC3-Ⅱ/Ⅰ,Beclin 1和p-ERK1/2蛋白表达水平显著上升(P＜0.05);与OGD/R组比较,羽扇豆醇组SOD,GSH以及p62和p-mTOR蛋白表达水平显著升高,LDH,MDA,ROS水平、Ca2+平均荧光强度、自噬小体个数、黄色荧光颗粒、红色荧光颗粒以及LC3-Ⅱ/Ⅰ,Beclin 1和p-ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);MAPK激活剂TBHQ逆转了羽扇豆醇对OGD/R海马神经元的损伤改善作用.结论 羽扇豆醇通过调节MAPK/ERK/mTOR信号通路来抑制OGD/R诱导的神经元自噬,起到保护大鼠海马神经元效果.