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血吸虫虫卵高表达蛋白SjE16在固有免疫中的作用研究

摘要虫卵是血吸虫的主要致病因素。日本血吸虫虫卵发育成熟的过程中产生大量的可溶性抗原,急性期诱导以粒细胞、巨噬细胞为主的免疫细胞趋化,形成以虫卵为中心的肉芽肿;慢性期肉芽肿发生纤维化,进而引起严重的并发症。以往对血吸虫虫卵的相关研究大多以血吸虫虫卵可溶性抗原(soluble egg antigens,SEA)为基础,但SEA成分复杂,难以寻找其中关键的致病分子。同时对血吸虫致病机制的研究大多集中于虫卵与机体适应性免疫之间的相互作用,对其与固有免疫的相互作用研究较少。虫卵肉芽肿形成的过程中,粒细胞与巨噬细胞等固有免疫细胞的趋化与活化发挥着重要的作用,因此研究虫卵抗原与中性粒细胞和巨噬细胞的相互作用对于深入了解虫卵的致病机制至关重要。<br>  本研究中,我们以虫卵中特异性高表达的SjE16分子为研究对象,通过毕式酵母真核表达系统和大肠埃希菌原核表达系统对该蛋白分别进行了表达与纯化,ELISA对重组蛋白的免疫反应性进行了鉴定。通过制备SjE16的小鼠多克隆抗体,抽提虫卵及成虫RNA,分别从蛋白和基因水平检测了其在虫卵中的特异性分布。在SjE16对宿主固有免疫反应的作用研究中,我们应用小鼠皮下气囊模型对SjE16在体内诱导机体炎症反应的作用进行了探索。并以小鼠原代中性粒细胞和巨噬细胞为细胞模型,在体外研究了SjE16对固有免疫细胞移行与细胞因子分泌功能的影响,对其可能的信号通路进行了初步探索。实验结果显示,我们通过真核与原核表达系统成功表达纯化了SjE16目的蛋白,重组蛋白具有很好的免疫反应性与免疫原性。SjE16在小鼠体内可明显募集固有免疫细胞,诱导炎症反应的发生。在体外,SjE16可显著促进中性粒细胞与巨噬细胞的迁移,同时刺激巨噬细胞细胞因子的转录表达与分泌,SjE16活化巨噬细胞的作用与细胞内 MAPK通路相关。

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