检索历史 清除

摘要目的：初步研究转脂蛋白（Fatty acid-binding protein4，FABP4）在脂肪组织影响人胆管癌细胞转移过程中的生物学作用以及可能的调控机制。<br>　　方法：无菌条件下获取小鼠脂肪组织及乳腺癌患者脂肪组织，制成脂肪组织浸出液，分别与人类胆管癌细胞系RBE、Hcccp810进行共培养。测定共培养前后细胞培养基中甘油和脂肪酸含量的变化，采用侵袭和划痕实验检测脂肪组织对人胆管癌细胞侵袭转移能力的影响，并经Western blot方法检测共培养后胆管癌细胞内转移相关蛋白MMP-2、MMP-9、TGF-β1表达的变化。采用脂肪特异荧光染料Bodipy研究脂肪组织共培养对肿瘤细胞内脂肪聚集的影响，研究FABP4基因在其中所起的作用，并采用 Western blot方法检测脂肪共培养后肿瘤细胞中EMT相关蛋白含量的变化，以及FABP4基因对EMT相关蛋白表达的影响。<br>　　此外，采用 FABP4腺病毒载体感染胆管癌细胞 RBE后，经尾静脉注射入裸鼠以制备胆管癌转移模型。应用小动物成像系统观察各组肿瘤细胞在各种内脏中分布和聚集情况，经HE染色检测小鼠肝脏和肺中实体瘤的形成情况，并通过免疫组化检测小鼠肝脏和肺增殖指标Ki67表达水平的变化，从而在动物体内研究FABP4基因对脂肪参与胆管癌转移调控的作用。<br>　　结果：小鼠和人的脂肪组织均能促进人胆管癌细胞的侵袭和迁移。脂肪浸出液中甘油和脂肪酸含量都明显升高（P<0.05），与肿瘤细胞共培养后培养基中脂肪酸含量明显降低（P<0.05）而甘油含量几乎不变，且脂肪组织与胆管癌细胞共培养后细胞内的MMP-9和TGF-β1的表达升高。脂肪组织与胆管癌细胞共培养后细胞内脂肪聚集增多，FABP4基因不仅促进了细胞内脂肪聚集，还促进胆管癌细胞的侵袭迁移能力。脂肪组织与胆管癌细胞共培养后侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9表达增高，EMT相关蛋白 Claudin1、Occludin、E-cadherin和β-catenin表达下降 SNAIL表达增加，Smad3无明显变化，表明肿瘤细胞间紧密连接作用减弱并向基质细胞转化，即发生了EMT，抑制FABP4基因功能会抑制EMT发生，而过表达FABP4会促进EMT的发生。尾静脉注射后24小时，经小动物成像发现脂肪会促进胆管癌细胞在动物体内的转移和在脏器内的聚集，脂肪共培养组小鼠肝脏和肾脏荧光强度分别比对照组高出28.8％和11.5%（P<0.05），FABP4基因高表达对这一现象有促进作用，FABP4过表达组小鼠肝脏、心脏、肾脏荧光强度比NC组分别高出26.4%、7.3%和22.3%（P<0.05）。尾静脉注射30天后，HE染色检测到脂肪共培养组中小鼠肝脏组织中形成实体瘤，免疫组化显示脂肪共培养组和 FABP4过表达组小鼠肝脏和肺组织中 Ki67表达水平较高，而FABP4在两种组织中均无特异表达。<br>　　结论：体内、外实验结果表明脂肪组织可促进胆管癌细胞的侵袭和迁移能力，其在胆管癌细胞内聚集也呈增强趋势，FABP4基因高表达可进一步增加脂肪在肿瘤细胞内的聚集，以及肿瘤细胞的体外侵袭集迁移能力。其中涉及的机制可能与FABP4介导的脂肪引起的癌细胞EMT有关。