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摘要目的：史他汀类药物对神经退变性疾病的临床治疗已引起高度重视，但其作用机制仍不十分清楚。为此，本研究采用体外培养神经细胞，观察他汀类中的洛伐他汀是否能对抗β-淀粉样肽（β-Amyloid peptide，Aβ）、冈田酸(Okadaic acid,OKA)、氟化物等引起的神经毒性作用，重点研究洛伐他汀对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）发病中的关键物质，如淀粉样前体蛋白（Amyloid Precursor Protein，APP）的代谢、尼古丁型乙酰胆碱受体（Nicotinic acetylcholine receptors，nAChRs）表达及丝裂体活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路等的作用，了解其相互作用关系，探讨他汀类药物非胆固醇依赖性神经保护的分子作用机制。<br>　　方法:选择原代培养的大鼠海马神经细胞及过表达APP670/671的SH-SY5Y细胞，用洛伐他汀、Aβ、OKA、氟化物、细胞外信号调节蛋白激酶（Extracellular signal regulated protein kinases,ERK）抑制剂、α7 nAChR受体拮抗剂等分别或合并处理培养细胞24-48小时。采用CCK-8试验检测细胞的存活率；用生物化学方法测定细胞内胆固醇含量、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性、及丙二醛（Methane dicarboxylic aldehyde,MDA）含量；用蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞中nAChR?7、?4、?3、β2等亚单位蛋白表达水平，APP代谢途径中α分泌型淀粉样前体蛋白（α-Form of secreted APP，αAPP）、β分泌型淀粉样前体蛋白（βAPP）、β淀粉样前体蛋白裂解酶1（β-Site amyloid precursor protein-cleaving enzyme1，BACE1）、β淀粉样前体蛋白裂解酶2（BACE2）及解聚素金属蛋白酶结构域蛋白10（Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein10，ADAM10）等的蛋白表达水平，ERK、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）及p38磷酸化及总蛋白表达水平；实时荧光定量PCR（Real-time PCR）测定nAChR亚单位的mRNA表达水平；用流式细胞仪检测细胞凋亡水平。所获实验数据用SPSS18.0统计软件包进行分析，采用单（或多）因素方差分析和配对t检验对数据进行处理。<br>　　结果：<br>　　（1）细胞模型：结果显示，原代培养的大鼠海马神经细胞纯度约达到85％，过表达APP670/671的SH-SY5Y细胞中APP的蛋白及mRNA表达水平均明显高于野生型细胞；用0.1μM的洛伐他汀处理，未观察到细胞毒性作用，胆固醇水平亦未见明显改变，故选择该浓度处理细胞。<br>　　（2）洛伐他汀的抗神经毒性作用：用0.5μM Aβ寡聚体（β-Amyloid peptide oligomers，AβOs）、20nM OKA、及20mg/L氟处理神经细胞48h，可分别引起细胞存活率下降、SOD的活性降低和MDA的含量增高等毒性作用；0.1μM洛伐他汀预处理24h，能分别减轻A?Os、OKA及氟化物等引起的细胞毒性作用；<br>　　（3）洛伐他汀对nAChRs的作用：0.1μM洛伐他汀24h预处理能使α7 nAChR蛋白及mRNA表达水平升高，而α4、α3和?2未见明显改变。<br>　　（4）洛伐他汀对APP代谢的作用：0.1μM洛伐他汀24h预处理能使αAPP的分泌增加、βAPP的分泌减少、BACE1蛋白表达水平降低、而BACE2和ADAM10的蛋白表达水平增高。<br>　　（5）洛伐他汀对MAPK信号转导通路的作用：0.1μM洛伐他汀24h预处理可使phospho-ERK1/2蛋白表达水平升高，而ERK1/2、JNK和p38总蛋白表达水平未发生明显变化，phospho-JNK和phospho-p38蛋白表达水平亦未见明显改变。<br>　　（6）洛伐他汀、ERK、α7 nAChR及αAPP的相互关系：联合应用洛伐他汀与ERK1/2抑制剂U0126或α7 nAChR拮抗剂MLA处理神经细胞，结果显示，U0126处理神经细胞，可以抑制phospho-ERK1/2的磷酸化，降低α7 nAChR蛋白表达水平，减少αAPP的分泌；同时，U0126可以阻断洛伐他汀引起的MAPK/ERK1/2信号转导通路活化、α7 nAChR蛋白表达水平升高以及αAPP分泌增加等作用。MLA处理神经细胞，仅能减少αAPP的分泌，对其自身的蛋白表达及phospho-ERK1/2的磷酸化均无明显影响；而MLA与洛伐他汀共同处理细胞，仅可见到洛伐他汀诱导的αAPP分泌增加作用被减弱，而MAPK/ERK1/2的活化以及α7 nAChR蛋白表达水平的上调均未被减弱。<br>　　结论：<br>　　（1）低浓度的洛伐他汀（0.01及0.1μM）处理大鼠海马神经细胞及过表达APP670/671的SH-SY5Y细胞，不产生明显细胞毒性，亦不引起细胞胆固醇水平的改变。<br>　　（2）洛伐他汀能减少A?、OKA及氟化物诱导的神经细胞死亡、SOD的活性降低和MDA的水平增高；<br>　　（3）洛伐他汀可引起MAPK/ERK1/2信号转导通路活化、α7 nAChR蛋白表达水平升高以及αAPP分泌增加，其作用机制可能为，首先活化phosphor-ERK1/2信号转导通路，该通路的活化刺激α7 nAChR的表达，最终增强APP的非淀粉样代谢过程，活化α-分泌酶，从而促进αAPP的分泌；<br>　　（4）洛伐他汀可能通过上述机制，以非胆固醇依赖的方式，产生对抗毒性物质的神经保护作用，为临床上应用他汀类药物治疗中枢神经系统的毒性损伤提供了重要的参考依据。