检索历史 清除

摘要三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）是我国特有的淡水良种育珠贝，易受病害威胁而遭受重大经济损失，开展三角帆蚌免疫相关基因研究具有十分重要的现实意义。本研究采用RACE技术，对高通量转录组测序所获得的三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）热休克蛋白70（HSP70）、肿瘤坏死因子α诱导蛋白8（TNFAIP8）、干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白1（GBP1）与Toll样受体2（TLR2）基因的长片段进行扩增，拼接得到这四种免疫相关基因的cDNA序列全长，采用荧光定量PCR（qRT-PCR）技术研究了HcHSP70和HcTNFAIP8基因在各组织中的表达分布情况及其应激表达情况，并采用Western-blot技术从蛋白质水平研究温度刺激对HcHSP70表达的影响。<br>　　HcHSP70基因cDNA序列全长2298?bp，开放阅读框为1974?bp，编码657个氨基酸，预测蛋白分子量大小为71.6?kDa。含有三个HSP70家族典型的标签序列，末端保守区域EEVD以及典型的重复位点GGXP。与其他物种HSP70同源性很高，最高达91％，通过构建系统进化树发现HcHSP70与其它4种软体动物HSP70聚为一支。HcHSP70在肝胰腺中表达量最高，其次是性腺，而在鳃、外套膜及肌肉中的表达量较低。实时荧光定量PCR和Western-blot技术显示，鳃组织中HcHSP70?mRNA和蛋白的表达量随水温上升而上调，37℃时表达量显著上升到最高值，而40?℃时表达量恢复至正常水平。<br>　　HcTNFAIP8基因cDNA序列全长1179?bp，开放阅读框为573?bp，编码190个氨基酸，预测分子量大小为23.64?kDa。HcTNFAIP8与长牡蛎CgTNFAIP8相似性最高为71%，且在系统进化树的同一个分支上。实时荧光定量PCR结果显示：HcTNFAIP8在性腺中表达量最高，其次为肝胰腺，而在鳃、外套膜及心脏中表达量较低；HcTNFAIP8的表达并不受PGN的诱导影响，而在LPS刺激后， HcTNFAIP8表达量出现先显著下调再上调情况，最终恢复接近到正常值。<br>　　HcGBP1基因cDNA全长为2418?bp，开放阅读框为1947?bp，编码648个氨基酸，预测分子量大小为76.28?kDa。同源序列比对发现HcGBP1与非洲爪蟾GBP1处于同一个大分支中；HcTLR2基因cDNA序列全长1177?bp开放阅读框为1032?bp，编码343个氨基酸，预测分子量大小为39.58?kDa，同源序列比对发现发现三角帆蚌与马氏珠母贝聚为一支。