检索历史 清除

摘要褶纹冠蚌(Cristaria plicata)是我国重要的淡水育珠蚌之一，易受病原体感染而发生疾病，对育珠能力会产生较大的影响，因此，开展对贝类分子免疫的研究具有重要意义。本文采用了巢氏 PCR方法和 RACE PCR技术克隆得到了褶纹冠蚌的Sigma型谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase，GST)基因的cDNA序列。<br>　　CpGST1 cDNA序列全长为1610 bp，其中690 bp的开放阅读框编码230个氨基酸，5’端非编码区320 bp，3’端非编码区600 bp。预测编码的蛋白分子量为25.8 kD，等电点为8.87，由SignalP软件分析发现没有信号肽。克隆得到的CpGST2 cDNA长为826 bp，其中642 bp的开放阅读框编码213个氨基酸，5’端非编码区151 bp，3’端非编码区33 bp。预测编码的蛋白分子量为23.9 kD，等电点为6.67，由 SignalP软件分析发现没有信号肽。<br>　　通过对 CpGST1和 CpGST2基因在褶纹冠蚌不同组织中的表达分析发现，在血淋巴、肝胰腺、闭壳肌、外套膜、鳃组织中均有表达，但表达存在一定的差异。CpGST1和CpGST2都在血淋巴中的表达量最低，其次是闭壳肌和外套膜，而在肝胰脏中的表达量最高。经嗜水气单胞菌刺激后，两个基因在血细胞和肝胰脏中的表达都表现出显著或极其显著差异。<br>　　本文还将基因扩增产物和表达载体 PET-32a经HindIII、XhoI双酶切之后，连接并成功构建了 PET-32a-CpGST2原核表达质粒。将该质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中，加IPTG至终浓度为1mmol/L，37℃诱导8 h，得到大量融和蛋白，用 Ni2+亲和层析镍柱纯化，并测得其纯化蛋白的活性为46.965±0.082μmoL/min/mg。