检索历史 清除

摘要目的：探讨siRNA沉默神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP-1）的表达后，对结肠癌细胞株HT-29增殖、凋亡、迁徙和侵袭能力的影响。<br>　　方法：规范培养细胞株HT-29，利用脂质体Lip-2000将NRP-1的荧光siRNA转染入HT-29细胞株中，48h后，通过荧光显微镜观察HT-29细胞株的转染效率；在成功转染的基础上，通过脂质体Lip-2000将不同的物质转染至结肠癌细胞中，分为三个不同的组别，即转染组（转入siRNA）、无意义序列组（转入siRNA的无意义的序列）和空白对照组（转入缓冲剂PBS）。通过实时荧光定量PCR检测三组细胞中NRP-1的mRNA的相对表达量；应用免疫细胞化学检测三组细胞中ki67蛋白的表达情况；MTT实验检测三组细胞的光密度值（optical density，OD）来测定细胞的增殖情况；流式细胞仪检测三组细胞的周期分布情况；吖啶橙/碘化丙啶（AO/PI）法检测三组细胞的凋亡情况；小室迁徙和侵袭实验分别检测三组细胞的迁徙和侵袭能力。重复以上实验3次。<br>　　结果：1、脂质体Lip-2000转染荧光siRNA48h后，荧光显微镜下观察转染入siRNA的细胞数与总细胞数的比值即为转染效率，三次实验均证明转染效率能达到80％以上。<br>　　2、实时荧光定量PCR结果显示：转染组细胞中NRP-1的mRNA的相对表达量较空白对照组明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　3、根据免疫细胞化学染色结果进行判定：转染组细胞中ki-67蛋白的表达量较空白对照组明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.01）。<br>　　4、MTT实验结果显示：在24h、48h、72h三个时间点，转染组细胞的增殖能力较空白对照组明显受到抑制，差异具有统计学意义（P＜0.01）。<br>　　5、流式细胞仪测定细胞周期实验结果显示：转染组细胞较空白对照组能明显将细胞周期阻滞在增殖前期G1期，增殖期S期的比例明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　6、吖啶橙/碘化丙啶实验显示：转染组细胞较空白对照组的凋亡水平明显上调，差异具有统计学意义（P＜0.01）。<br>　　7小室迁徙实验表明：转染组细胞较空白对照组穿过上小室的基质膜到达上小室背面的细胞数量明显减少，差异具有统计学意义（P＜0.01）。<br>　　8小室迁徙实验表明：转染组细胞较空白对照组穿过上小室的基质膜到达上小室背面的细胞数量明显减少，差异具有统计学意义（P＜0.01）。<br>　　结论：1、转染 NRP-1的 siRNA后，结肠癌细胞的增殖、迁徙、侵袭能力显著下降，凋亡水平显著升高。<br>　　2、NRP-1可能成为治疗结肠癌的新靶点。<br>　　3、NRP-1的siRNA可能成为治疗结肠癌的新的治疗手段。