检索历史 清除

摘要目的：通过脂质体Lip-2000转染神经纤毛蛋白-1（NRP-1）的干扰RNA（siRNA），使人胃腺癌细胞株 AGS中神经纤毛蛋白-1的 mRNA沉默，进而观察 NRP-1对胃癌细胞株一系列生物学行为的影响，为研究一种以 NRP-1为靶点的新型靶向药物治疗胃癌提供必要的理论依据。<br>　　方法：常规培养胃癌细胞株 AGS，严格按照 siRNA的使用说明进行操作，首先通过脂质体Lip-2000转染NRP-1的荧光干扰RNA至AGS细胞株中，48小时后在荧光显微镜下观察 AGS细胞株的转染效率，转染效率达60％以上即可认为转染成功；通过脂质体 Lip-2000将不同的物质转染至胃癌细胞株 AGS中，将胃癌细胞株分为三个不同组别，即转染组（转染 siRNA）、无意义序列组（转染 siRNA的无意义序列）和空白对照组（转染缓冲剂 PBS）。首先绘制细胞生长曲线，通过实时荧光定量 PCR分别检测三组中 NRP-1的 mRNA的相对表达量；免疫细胞化学法分别检测三组细胞中ki-67蛋白的表达情况；MTT分别测定三组的增殖情况；流式细胞仪分别测定三组的细胞周期；Transwell小室实验分别检测三组的侵袭和迁徙能力。<br>　　结果：<br>　　1、RT-PCR结果显示：将 NRP1-siRNA转染入 AGS细胞后（通过脂质体），转染组 NRP-1 mRNA表达水平较对照组显著下调，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　2、根据免疫细胞化学染色结果进行判定，转染 NRP1-siRNA组的胃癌AGS细胞组与对照组比较，ki-67蛋白的相对表达量显著下调，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　3、MTT法显示：转染组的胃癌AGS细胞增殖能力较对照组显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　4、流式细胞术检测结果显示：转染组胃癌 AGS细胞生长周期出现抑制，停滞在Gl期，较对照组显著增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　5、小室迁徙实验表明：转染组的胃癌 AGS细胞迁徙能力显著下降，与对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　6、小室侵袭实验表明：转染组的胃癌 AGS细胞侵袭能力显著下降，与对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　1、应用RNAi技术，设计并合成针对NRP-1的 siRNA，转染后能有效的下调AGS细胞NRP-1 mRNA的表达。<br>　　2、胃癌 AGS细胞经 NRP1-siRNA转染后，ki-67蛋白的表达量显著下降，细胞增殖能力明显下降，细胞停滞于G1期。<br>　　3、胃癌 AGS细胞经 NRP1-siRNA转染后，细胞的迁徙、侵袭能力显著下降，恶性生物学行为受到抑制。<br>　　4、NRP-1在胃癌细胞中影响细胞的一系列生物学行为，为 NRP-1成为新的胃癌治疗靶点提供理论基础，具有潜在的临床应用前景。