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摘要目的:探讨CTP-FoxM1抗原负载DCs疫苗对C57BL/6小鼠肝癌Hepa1-6细胞皮下瘤模型的免疫预防效应，为临床应用DC疫苗防治肝癌奠定了理论基础。<br>　　方法:<br>　　(1)根据GenBank选出C57BL/6小鼠FoxM1的关键抗原表位序列串连为4聚体与CTP连接，将已连接好的CTP-FoxM1重组基因插入到pCold-TF载体上，进而构成pCold-TF-CTP-FoxM1质粒，并通过大肠杆菌BL21工程菌表达该蛋白，且通过镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)进行纯化，得到目的蛋白后经超滤浓缩杯浓缩，Western blot鉴定目的蛋白。细胞免疫荧光和激光共聚焦观察融合蛋白CTP-FoxM1在DCs中的亚细胞定位情况。<br>　　(2) CTP-FoxM1、CTP、FoxM1蛋白以及对照组PBS分别作用DCs48h后, CCK-8试剂盒检测抗原负载DCs疫苗刺激同种异体淋巴细胞增殖能力，LDH试剂盒检测抗原负载DCs疫苗体外杀伤Hepa1-6肝癌细胞株的CTL应答效应。<br>　　(3) CTP-FoxM1、CTP、FoxM1抗原负载的DCs疫苗免疫C57BL/6小鼠3次后皮下注射Hepa1-6肝癌细胞株，观察抗原负载DCs疫苗对C57BL/6小鼠肝癌的免疫预防效应。<br>　　结果:<br>　　(1)成功构建了pCold-TF-CTP-FoxM1重组质粒；在37℃、1mM IPTG诱导3h的条件下，获取了高效、可溶性CTP-FoxM1融合蛋白的表达；并经 Ni2+-NTA亲和层析柱纯化出纯度约90％的CTP-FoxM1融合蛋白；Western Blot进一步鉴定CTP-FoxM1融合蛋白；细胞免疫荧光和激光共聚焦观察显示出CTP-FoxM1融合蛋白转导进入DCs内主要定位于胞浆。<br>　　(2)融合蛋白CTP-FoxM1负载DCs疫苗与CTP、FoxM1负载DC疫苗相比，能够更明显地刺激同源异体淋巴细胞的增殖，且增殖能力达到最佳效果是在DCs与淋巴细胞以效靶比为10:1的比例条件下。在杀伤Hepa1-6肝癌细胞株CTL应答效应的体外实验中，CTP-FoxM1抗原负载DCs疫苗对Hepa1-6肝癌细胞株的杀伤效应明显强于其他实验组及其对照组。<br>　　(3) CTP-FoxM1、CTP、FoxM1抗原负载DCs疫苗免疫C57BL/6小鼠后产生抗肝癌Hepa1-6细胞皮下瘤模型的免疫预防效应观察中，在皮下瘤建立后的第7、9、11、13、15、17天观测，CTP-FoxM1对小鼠皮下瘤的免疫预防效应明显优于其他实验组及对照组。<br>　　结论:<br>　　(1)经 Ni2+-NTA亲和层析得到较高纯度的融合蛋白CTP-FoxM1，并由激光共聚焦观察可知CTP-FoxM1具有明显DCs的胞浆定位偏性，为后续制备CTP-FoxM1负载的DC疫苗奠定基础。<br>　　(2)融合蛋白CTP-FoxM1负载DCs疫苗能够有效地刺激同源异体的淋巴细胞增殖，并对体外Hepa1-6肝癌细胞株起特异性CTL应答效应。<br>　　(3) CTP-FoxM1抗原负载DCs疫苗对C57BL/6小鼠皮下肝癌模型起到免疫预防的作用，因此，为临床应用DC疫苗防治肝癌奠定了理论基础。