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摘要第一部分 LPS及Poly(I:C)刺激RSV感染后期小鼠气道炎症和气道高反应性变化的研究<br>　　目的：婴幼儿期感染RSV与随后反复喘息及儿童哮喘的发生密切相关，但其危险因素及具体机制尚不清楚。本实验建立RSV感染后期暴露于LPS及Poly(I:C)的动物模型,探讨RSV感染后暴露于LPS及Poly(I:C)诱发的气道炎症，进一步明确RSV感染后反复喘息的致病机制。<br>　　方法：小鼠随机分为六组：对照组、LPS组、RSV组、RSV+LPS组、Poly(I:C)组及RSV+Poly(I:C)组。对照组、LPS组、RSV组及RSV+LPS组小鼠100μl病毒液滴鼻后第35天给予LPS10μg/50μl PBS或PBS50μl，隔天滴鼻，共四次，于末次滴鼻后24小时收集标本（第42天）；Poly(I:C)组：100μl病毒对照液滴鼻后第35天给予Poly(I:C)10μg/50μl PBS滴鼻，第三天收集标本；RSV+Poly(I:C)组：100μl病毒液滴鼻后第35天给予Poly(I:C)10μg/50μl PBS滴鼻，第三天收集标本。计数BALF中细胞总数及分类计数，H＆E染色观察肺部病理损伤，检测小鼠AHR，ELISA法检测BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13、MMP-9及MMP-12水平。<br>　　结果：与对照组、LPS组及RSV组比较，RSV+LPS组小鼠BALF中总的细胞数及AHR均显著增高（P<0.001），RSV+LPS组小鼠肺组织炎症细胞浸润也较其他三组增强(P<0.01)，BALF中MMP-12表达也显著高于其余三组（ P<0.05），而IL-4和IL-13较RSV组明显降低(P<0.01)，MMP-9及IFN-γ变化无显著差异。<br>　　RSV+ Poly(I:C)组小鼠气道炎症细胞浸润总数及气道反应性（AHR）均显著高与对照组、Poly(I:C)组及RSV组（P<0.05）；肺组织病理损伤RSV+Poly(I:C)组小鼠较对照组及RSV组加重（P<0.01），同时RSV+Poly(I:C)组小鼠BALF中MMP-9水平较其它三组明显升高（P<0.05），而RSV+Poly(I:C)组与单纯RSV组相比，BALF中IL-4显著降低（P<0.01），MMP-12、IFN-γ和IL-13降低无显著差异。<br>　　结论：LPS及Poly(I:C)在RSV感染后期均可引起气道炎症及AHR加重，可能通过MMP-12及MMP-9过表达加重气道炎症反应。<br>　　第二部分 MMP-12介导RSV感染后期LPS刺激小鼠气道炎症及AHR<br>　　目的：MMP-12与气道炎症反应及组织重塑密切相关，研究第一部分发现RSV感染后期再次暴露于LPS后，小鼠气道炎症及AHR均显著增高，同时BALF中MMP-12表达也明显上调。本实验进一步探讨MMP-12对RSV感染后期暴露于LPS引起的气道炎症和AHR的影响。<br>　　方法：灌胃给予小鼠MMP-12特异性抑制剂MMP408。小鼠随机分为对照组、RSV组、LPS组、RSV+LPS组及RSV+LPS+MMP408组。细胞计数仪计数BALF中细胞总数及各分类细胞数，小鼠肺功能仪检测气道阻力值（Penh），HE染色及MASSON染色分别评价抑制MMP-12后小鼠肺组织病理损伤及纤维蛋白沉积情况。<br>　　结果：用MMP408成功抑制小鼠肺组织MMP-12的表达。MMP-12被抑制后小鼠气道炎症反应及AHR较RSV+LPS组小鼠明显下降（ P<0.001）,特别是 AHR可以恢复到对照组水平；其中RSV+LPS+MMP408组小鼠BALF中中性粒细胞显著下降，淋巴细胞有增多趋势，无显著差异。从肺组织切片可以观察到MMP-12被抑制后，小鼠肺部炎症细胞浸润较RSV+LPS组明显减少（P<0.01），同时肺部纤维蛋白的沉积也显著减少（P<0.01），都没有恢复到对照组水平。<br>　　结论：RSV感染后期暴露于LPS引起气道炎症及AHR，抑制 MMP-12表达后可部分缓解小鼠气道炎症，AHR恢复到正常水平，提示MMP-12参与致病过程，可以作为RSV感染后期暴露于LPS引发气道炎症治疗的干预靶点。