检索历史 清除

摘要目的：<br>　　以小鼠S180肉瘤为研究对象，观察蝎毒多肽提取物(PESV)联合雷帕霉素(RAPA)对S180肉瘤生长的影响及自噬相关因子 Beclin1和 MAP1LC3A和肿瘤干细胞标记物CD133和CD90的蛋白表达变化，探讨蝎毒多肽提取物抑制S180肉瘤的作用机制，为临床抗肿瘤治疗提供理论依据。<br>　　方法：<br>　　1.建立小鼠S180肉瘤皮下荷瘤模型，随机分为荷瘤对照组、PESV高、低剂量组、雷帕霉素(RAPA组)和联合组(即PESV高+RAPA组)，每组10只，连续干预21天。隔日用游标卡尺测量肿瘤体积和用天平测小鼠体重，绘制肿瘤体积增长曲线并计算抑瘤率，观察各实验用药组对S180肉瘤移植瘤生长的抑制作用。<br>　　2.常规HE染色，光镜下观察S180肉瘤组织病理学改变。<br>　　3.激光共聚焦显微技术检测S180肉瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表达。<br>　　4.免疫组织化学法检测S180肉瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表达。<br>　　5.Western blot法检测S180肉瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表达水平。<br>　　结果：<br>　　1.各个实验用药组对小鼠S180肉瘤移植瘤生长的影响<br>　　药物干预后，PESV高、低剂量组、RAPA组和联合组小鼠S180肉瘤移植瘤体积增长速度较荷瘤对照组均减慢，瘤重亦降低，抑瘤率分别为25.4％、15.3%、34.0%和42.5%，差异均有统计学意义(P<0.05，P<0.01)；与RAPA组比较，联合组的瘤重和肿瘤体积亦均存在显著差异(P<0.05)；与PESV低剂量相比，PESV高剂量组肿瘤体积减小，肿瘤生长减慢(P<0.05)。<br>　　2.各个实验组肿瘤组织的病理学变化<br>　　HE染色后光镜下观察，可见对照组坏死区较少且面积较小，少见核固缩等形态学变化。联合组、RAPA组和PESV高、低剂量组可见多个大面积片状坏死区，大部分肿瘤细胞呈呈现核固缩、核碎裂等多种细胞死亡形态学改变。联合组肿瘤组织坏死区域最大。给药组亦可见肿瘤细胞胞质无定形，核碎断的表现，可能是肿瘤细胞自噬的结果。癌巢周围有单核细胞等炎细胞的浸润。<br>　　3.PESV联合RAPA对S180肉瘤组织Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表达水平的影响<br>　　应用激光共聚焦显微镜技术可见，Beclin1、MAP1LC3A、CD133和 CD90在胞浆与胞膜上均有表达，CD133与CD90主要表达于细胞膜上，为绿色荧光着色。与荷瘤对照组相比，其它给药组的Beclin1和MAP1LC3A荧光强度均增高，而CD133与CD90荧光强度降低。联合组Beclin1和MAP1LC3A荧光强度最高，CD133与CD90荧光强度最低。<br>　　免疫组织化学法染色结果显示，与荷瘤对照组比较，给药组 Beclin1、MAP1LC3A表达均增多(P<0.05，P<0.01)；CD133和CD90表达降低(P<0.05，P<0.01)。联合组Beclin1、MAP1LC3A表达显著增多(P<0.01)，CD133和CD90表达显著降低(P<0.01)。与PESV低剂量组相比，PESV高剂量组Beclin1和MAP1LC3A表达增多，CD133和CD90表达明显降低(P<0.05)。<br>　　Western blot半定量法检测结果显示，联合组、RAPA组，PESV高低剂量组与荷瘤对照组比较，Beclin1、MAP1LC3A的表达条带均增高，CD133和CD90的表达条带均减弱。联合治疗组Beclin1、MAP1LC3A的表达条带表达显著增高(P<0.01)，CD133和CD90的表达条带显著减弱(P<0.01)。检测结果与免疫组织化学法和免疫荧光共聚焦法检测结果基本一致。<br>　　结论：<br>　　1. PESV联合RAPA可明显抑制小鼠S180移植瘤的生长；<br>　　2. PESV与RAPA可分别上调Beclin1、MAP1LC3A蛋白表达，可能与促进S180肉瘤细胞自噬性死亡有关。<br>　　3.PESV与RAPA可分别下调CD133和CD90蛋白表达，可能与抑制S180肉瘤中肿瘤干细胞生长有关。<br>　　4.PESV联合RAPA可能通过协同增强细胞自噬和抑制肿瘤干细胞发挥抗肿瘤效应。