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摘要本文分析了WAS蛋白缺陷对记忆B细胞和滤泡辅助T细胞功能的影响。本研究分为两个部分：<br>　　第一部分：WAS蛋白缺陷对生发中心B细胞和记忆B细胞功能的影响及机制研究。<br>　　目的：免疫记忆是机体适应性免疫应答的核心。免疫记忆的缺失或失调可引起多种免疫性疾病。免疫系统单基因遗传病称为原发性免疫缺陷病（PID），PID对研究人类免疫系统运行规律意义重大。WAS综合征是一种罕见的X-连锁隐性遗传PID，WAS突变导致WAS患者产生特异性抗体功能缺陷。本研究以 WAS患者和 WASKO小鼠为模型，讨论 WASP影响 MBCs形成及其维持，免疫记忆应答，GCB和MBCs活化及分化的分子机制。<br>　　方法：我们通过流式细胞术检测 WAS患者或健康对照外周血B细胞各亚群的百分比和数量。T细胞依赖性抗原免疫后WASKO和 WT小鼠脾脏中B细胞各亚群的百分比和数量。并检测GCB及MBC的增殖和凋亡。我们使用 WASKO/WT骨髓嵌合体小鼠模型以验证WASp缺陷时特异性免疫缺陷是否固有存在。<br>　　结果：WAS患儿血浆中分泌抗原特异性免疫球蛋白的量明显较同龄健康儿童减少。WASKO小鼠抗原特异性GCB细胞、浆母细胞及记忆B细胞数量较WT小鼠明显减少，抗原特异性浆细胞占浆细胞比例较WT小鼠也明显下降；WASKO小鼠GCB细胞及记忆B细胞增殖功能受损。<br>　　结论：WASp作为肌动蛋白骨架蛋白调节因子参与GCB和MBCs的生成和分化，WASp缺陷时 T细胞依赖性免疫反应尤其是GCB向MBC转化途径存在缺陷。<br>　　第二部分：WAS蛋白缺陷对滤泡辅助 T细胞功能的影响和机制研究。<br>　　目的：WAS是血液系统的特异性调节肌动蛋白，WAS病人以湿疹、血小板减少伴免疫缺陷为主要特征。本研究以WAS患者及WASKO小鼠为模型，以明确WASp缺陷对滤泡辅助T细胞（Follicular helper T-cell, Tfh）细胞数量及功能的影响，并明确缺陷Tfh细胞对免疫记忆功能的影响。<br>　　方法：通过流式细胞数检测 WAS患者或健康对照外周血及WASKO和 WT小鼠脾脏中 Tfh细胞的频率和数量。我们使用WASKO/WT骨髓嵌合体小鼠模型以验证WASp缺陷时Tfh缺陷是否固有存在。我们把WASKO或 WT小鼠的初始CD4 T细胞分别过继性移植给 CD4KO小鼠，同时在体外把 WAS患者和健康对照者及WASKO及WT小鼠的Tfh细胞和初始B细胞共培养，ELISA检测细胞培养液中IgG分泌情况，以验证缺陷Tfh对免疫记忆功能的影响。<br>　　结果：WAS患者外周血Tfh细胞增殖降低，凋亡增加，其频率和数量相较于健康对照明显减少。WAS患者Tfh细胞中ICOS的表达增加，BCL6表达减少。这一结果在 WASKO小鼠中得到复制。但在骨髓嵌合体小鼠中，WASKO组骨髓嵌合小鼠相较于 WT组小鼠表现出Tfh细胞及BCL6表达明显降低，但是ICOS表达也降低。体内Tfh功能试验所得WASKO组移植小鼠体内T细胞依赖性记忆B细胞及生发中心B细胞生成明显降低。体外Tfh功能实验WAS组细胞培养液分泌IgG明显降低。<br>　　结论：WASp缺陷时Tfh细胞数量及功能存在固有缺陷，Tfh细胞上BCL6及ICOS表达固有缺陷。Tfh细胞对体液免疫记忆反应发挥重要作用，WASp缺陷通过下调BCL6的转录水平导致Tfh细胞分化缺陷。