摘要裂片石莼隶属于绿藻门,含有丰富的蛋白质、活性物质,在很多方面如食物、制药、保健、环保等具有广阔的利用价值,是一种潜在的人工开发养殖的藻种。在我国,裂片石莼主要分布于福建、广东、广西、台湾和海南等地。近年来随着温度的变暖,发现裂片石莼在中国的分布呈现北移现象。本研究将裂片石莼置于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、33℃和35℃中培养,通过观察不同温度下裂片石莼生长及细胞发育、叶绿素含量及叶绿素荧光特性、藻类抗氧化酶和 MDA(丙二醛)含量及相关基因表达量的变化,来探讨裂片石莼对温度适应机制,综合分析裂片石莼北移的可能原因,同时为人工养殖提供初步的理论依据。<br> 本研究主要内容包括:⑴15℃-30℃培养时,裂片石莼生长量均显著好于其他温度下的值(P<0.05),其中25℃藻体的生长量最大(P<0.05),细胞逐渐发育成熟并产生孢子,20℃下产生孢子量最多(P<0.05)。5℃、10℃、33℃和35℃培养时,藻体生长受到抑制,且无孢子产生;甚至在5℃、35℃等极端温度下培养,短期内藻体就会遭受不同程度的损伤,导致藻体发白、腐烂或降解。研究表明:裂片石莼生长发育最适温度范围为15℃-30℃,过高或过低均不适宜,5℃和35℃分别为其极低和极高温度,裂片石莼对低温的耐受性大于高温。⑵不同温度培养后检测裂片石莼叶绿素荧光参数,结果显示:25℃组的叶绿素含量、叶绿素荧光参数(Fv/Fm,Fv'/Fm',α,qP等)最大,随着温度的升高或降低,各项指标逐渐降低;而非光化学淬灭系数 NPQ则随温度升高或者降低逐渐变大,10℃组的最大,5℃、35℃培养组的各项生理指标均最低。5℃-30℃处理组藻体经过25℃恢复培养2天后 Fv/Fm,Fv'/Fm'均有所提高(25℃为对照),其中10℃培养组的藻体的各指标提高最大,而33℃、35℃处理组再培养后 Fv/Fm,Fv'/Fm'则几乎没有变化。结果表明25℃是裂片石莼的光合作用最强,高于或者低该温度对光合过程都会产生一定的胁迫,高温对裂片石莼的光合系统的胁迫大于低温。⑶片石莼在不同温度培养6h和7d后检测 SOD,CAT,POD活性及MDA含量,结果如下:培养6h后,测得25℃组的SOD,CAT和 POD活性最低(P<0.05),随温度的升高或降低,抗氧化酶的活性均显著提高(P<0.05)。培养7d后,25℃组的SOD活性最大(P<0.05),随着温度的升高或降低活性显著下降(P<0.05)。5℃、10℃、33℃、35℃组的CAT活性显著小于25℃组的酶活(P<0.05),15℃、20℃和30℃组的CAT活性显著大于25℃(P<0.05)。而5℃、10℃、15℃、33℃和35℃处理组的POD活性显著低于25℃组的值(P<0.05),20℃和30℃条件下的POD活性仍然高于25℃的值(P<0.05)。不同温度培养6h后测得的25℃组的MDA含量显著低于其他组别(P<0.05),随着温度的升高或者降低含量逐渐升高。培养7d后,10℃、15℃、20℃和30℃处理组的MDA含量降低,并与25℃组显著差异(P>0.05),5℃、33℃、35℃处理组的MDA含量则显著增高(P<0.05)。说明短时间的温度变化和胁迫会导致 SOD活性迅速升高,而经过长期的温度胁迫,藻类 SOD活性则下降。这可能是因为短期胁迫导致藻体抗氧化酶活性激增,产生应激反应,而长期胁迫或许造成藻体抗氧化系统受损,酶活变化有限,进而降低了应激胁迫的能力。⑷通过Realtime qPCR法研究不同温度培养的裂片石莼 Mnsod,cat,psaA和psbA等基因的表达特点,发现:不同温度培养7d后 Mnsod基因、psaA基因、psbA基因的表达量在25℃培养下最高(P<0.05),随着温度的升高或降低基因表达量显著降低(P<0.05)。15℃、20℃、30℃处理组的cat基因表达量显著大于25℃组的值(P<0.05),低于15℃或高于30℃基因表达量显著降低(P<0.05)。该结果与相应条件下裂片石莼的酶活性变化一致。
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