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摘要第一部分MuSK-mCherry融合荧光蛋白的构建及对重症肌无力患者MuSK抗体的检测<br>　　目的：构建肌肉特异性激酶（MuSK）与红色荧光蛋白（mCherry）的重组融合蛋白（MuSK-mCherry），并作为抗原用于重症肌无力（MG）患者血清中的MuSK抗体的检测。<br>　　方法：首先通过 PCR扩增 pRSET-B载体中的mCherry基因，扩增后的mCherry基因经加A尾后克隆至T载体（pGEM-TEasy Vector），并将克隆载体转化至E coliDH5α细胞株。纯化提取质粒经Age I酶切后，克隆至含 MuSK细胞外区基因的载体 pMT/BiP/V5-His（MuSK）上，连接 mCherry基因与人 MuSK细胞外区第22~452位氨基酸肽段基因，并将连接基因转化至E coliDH5α细胞株，以构建MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因。其次，将制备的上述重组载体转染果蝇 S2细胞，采用共聚焦显微镜检查表达出的MuSK-mCherry融合荧光蛋白。最后，以MuSK-mCherry融合蛋白检测 MG患者血清中 MuSK抗体。<br>　　结果：成功地构建了 MuSK-mCherry融合蛋白基因，并得到了表达。经对已知 MuSK抗体阳性的MG患者血清中的MuSK抗体的检测证实，构建的MuSK-mCherry融合蛋白在荧光免疫沉淀试验中可以检测到MuSK抗体。<br>　　结论：以 MuSK细胞外肽段与 mCherry构建的融合荧光蛋白作为抗原，可以用于 MG患者血清中的MuSK抗体的检测。<br>　　第二部分rapsyn基因外显子区多态性与重症肌无力相关性研究<br>　　目的：研究重症肌无力（MG）与突触受体相关蛋白（rapsyn）外显子基因单核苷酸多态性（SNPs）之间的相关性。<br>　　方法：采用 PCR方法扩增 MG患者组（132例）以及正常对照组(153例)外周血中提取的DNA中 rapsyn基因的8个外显子，并测序。测序结果与NCBI SNPs数据库中野生型rapsyn基因序列（GenBank No. Z33905）进行比较，分析 rapsyn基因8个外显子区 SNPs。运用 SHEsis在线软件进行等位基因、基因型频率计算、Hardy-Weinberg遗传平衡检验，进行病例-对照关联分析，查找 rapsyn基因突变位点以及 MG临床症状与rapsyn基因突变之间的相关性。<br>　　结果：rapsyn基因的第1、2、4、5、6、7、8等7个外显子测序结果与野生型基因序列吻合，未发现有基因突变。第3外显子中发现新SNP：L222R[CTG>CGG(2)]或T665G。SNP L222R等位基因频率和基因型频率在患者组和对照组均符合 Hardy-Weinberg遗传平衡（P>0.05），具有群体代表性。G等位基因频率在患者组和对照组之间无统计学差异（P﹥0.05），3种基因型 TT、TG、GG在患者组（42.4％V48.5%V9.1%）和对照组（49.0%V33.3%V17.6%）存在显著性差异（P＜0.05），并且携带 GG基因型对照组显著高于患者组（P＜0.05），表现为隐性模型特征。<br>　　结论：rapsyn基因第三外显子 L222R（T665G）是 MG新的SNP，该 SNP与 MG遗传易感性存在相关性；G等位基因可能是 MG的保护因子。