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PLGA导管联合雪旺细胞与骨髓间充质干细胞修复脊髓损伤的实验研究

摘要目的:比较两种不同三维结构PLGA神经导管移植于完全性脊髓损伤动物模型后对其功能恢复的影响。评估导管联合细胞的治疗策略对完全性脊髓损伤的治疗效果。<br>  方法:采用PLGA材料做成两种不同三维结构的神经导管,移植于完全性脊髓损伤大鼠模型上。术后通过运动功能恢复情况,空腔形成大小,轴突再生数量以及损伤区域神经元数量来比较两组间的差异。将PLGA导管联合激活态的雪旺细胞和或骨髓间充质干细胞移植于成年大鼠脊髓损伤形成的3mm胸脊髓缺损处。术后第3天及每周测量各组大鼠BBB评分及爬网格运动;术后第2,4,8周检测各组大鼠电生理恢复情况。术后第4和8周,功能检测完毕后,取脊髓标本制作冰冻切片,并进行HE和Nissl染色来计算空腔面积大小,GFAP观察疤痕形成情况,免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞分化、神经再生、髓鞘形成及特异神经组织抗原表达情况同时采用透视电镜观察髓鞘形成情况。术后第8周,AS+MS组部分大鼠接受了再切手术。<br>  结果:术后8周在促进运动功能恢复、减小空腔面积大小、增强轴突再生及神经元存活上导管1较导管2更有优势。体内移植4周以后,接受神经导管联合激活态的雪旺细胞与骨髓间充质干细胞移植的大鼠,在BBB评分和电生理检测上显示了明显的神经功能恢复。然而,接受空导管移植和损伤对照的大鼠未能检测到神经功能恢复。移植后第4周和第8周,免疫组织化学检测分析显示移植的骨髓间充质干细胞于移植损伤区域存活,并分化成神经元样细胞与宿主神经元建立连接。在激活态雪旺细胞与骨髓间充质干细胞联合移植组,损伤区域观察到大量的再生纤维,同时NF200免疫组化染色确认这些再生纤维为神经组织。此外,在移植损伤区域检查到髓鞘碱性蛋白阳性表达的髓鞘结构,并通过电镜检查予以证实。很重要的一点是,在激活态雪旺细胞与骨髓间充质干细胞联合移植大鼠的损伤区域发现,少量骨髓间充质干细胞来源的神经元样细胞除表达成熟神经元标志物外,还表达突触素。<br>  结论:本研究的结果表明,采用PLGA材料做成内含微导管的神经导管移植于完全性脊髓损伤处,能良好的与宿主脊髓结合。ASC诱导的MSC来源的神经元样细胞与内源性神经元细胞相互接触及局部神经通路的形成,促进了严重脊髓损伤后的功能恢复。这种移植物来源的神经连接所带来的功能重建通过脊髓的再次横断予以证实。AS+MS组接受再切手术后大鼠BBB评分立即降到完全性脊髓损伤水平。多孔道的PLGA神经导管有效的将完全性脊髓损伤的断端桥接在一起,同时联合细胞移植策略促进了MSCs的存活和神经分化,增强了轴突的再生和功能的恢复。该研究结果表明,联合移植激活态的雪旺细胞和骨髓间充质干细胞与多孔道的高分子聚合物神经导管,可以作为一种新的治疗脊髓损伤的组合策略。

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