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摘要目的：<br>　　食管癌是全球威胁人类生命和健康的最常见恶性肿瘤之一，我国每年食管癌发病人数占全球发病总人数的一半以上，以食管鳞癌最为常见。放射治疗是食管癌三大治疗手段之一，而放射抵抗性是导致其治疗失败的主要原因。我们前期研究发现NRAGE在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞，且NRAGE亚细胞定位变化可能参与了食管癌细胞放射抗性的形成。本研究旨在通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系，采用Real-Time PCR和Western Blot验证转染效果，并通过细胞克隆形成实验、流式细胞术等观察该基因影响放射抗性的具体机制，进一步明确NRAGE基因与食管鳞癌细胞放射抗性的关系，为将来NRAGE基因在食管癌放射治疗中的研究提供细胞模型及实验依据。<br>　　方法：<br>　　1采用Real-Time PCR及Western Blot检测3种食管癌细胞系（TE13、Eca109、Kyse170）中NRAGE的mRNA及蛋白表达情况，选择NRAGE低表达细胞进行稳定转染。<br>　　2以脂质体为载体，将携有NRAGE基因的真核表达质粒p3XFLAG-CMV-14-NRAGE转染NRAGE低表达的细胞,实验分二组， NRAGE基因转染组(Eca109/NRAGE组)和空白对照组（Eca109组）。采用G418筛选获得稳定转染的细胞系（Eca109/NRAGE）。<br>　　3采用Real-Time PCR及Western Blot验证转染组和空白对照组细胞中NRAGE基因的表达。<br>　　4采用平板克隆形成实验比较转染组和空白对照组细胞的放射抗性，探讨该基因对食管鳞癌细胞放射抗性的影响。<br>　　5应用流式细胞术检测转染组和空白对照组细胞的细胞周期变化。<br>　　6通过流式细胞术检测转染组和空白对照组细胞的凋亡情况。<br>　　7应用Real-Time PCR及Western Blot验证两组细胞中β-catenin基因的表达。<br>　　结果：<br>　　1 Real-Time PCR及Western Blot结果显示NRAGE的mRNA及蛋白表达水平在Eca109细胞中最低，因此选择Eca109细胞进行以下试验。<br>　　2 Real-Time PCR及Western Blot结果证实转染组NRAGE的mRNA及蛋白表达均高于空白对照组(P=0.000)，证明外源性NRAGE基因已整合于细胞基因组中，并获得稳定表达。<br>　　3平板克隆形成实验证明Eca109与Eca109/NRAGE组细胞的放射敏感性不同，（D0值分别为1.54和1.76Gy，Dq值分别为1.29和1.41Gy，SF2值分别为0.44和0.51，N值分别为1.838和1.802)。转染组细胞的D0、Dq值均增大，且SF2值是是空白对照组细胞的1.159倍，细胞存活曲线肩区增宽，这均提示NRAGE转染组细胞比空白对照组更具有放射抗性。<br>　　4流式细胞技术分析显示，与对照组细胞相比，转染组细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加，而对射线最敏感的G2/M期减少。<br>　　5细胞凋亡检测表明，Eca109/NRAGE组细胞凋亡率较Eca109组细胞降低（P=0.0029）。<br>　　6 Real-Time PCR及Western Blot结果显示β-catenin的mRNA及蛋白表达在Eca109/NRAGE组细胞中的表达量明显高于Eca109组细胞(P=0.000)。<br>　　结论：<br>　　1通过脂质体介导，可以建立NRAGE基因稳定表达的食管癌细胞系。<br>　　2 NRAGE参与了Eca109/NRAGE组细胞放射抗性的形成。<br>　　3 NRAGE改变了Eca109/NRAGE组细胞的细胞周期分布和凋亡，并可能影响食管癌细胞放射敏感性。<br>　　4 NRAGE可能通过激活Wnt/β-catenin信号转导通路参与放射抗性的形成。