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摘要蓝藻NDH-1位于类囊体膜上，具有保守的“L”构型，参与了许多重要的生物能量反应，包括细胞呼吸、围绕光系统I的循环电子传递(NDH-CET)和CO2吸收，尤其在蓝藻细胞抵御高温等胁迫环境时起着至关重要的作用。NDH-1L为蓝藻NDH-1的主要类型，参与了NDH-CET和细胞呼吸。先前的研究结果表明高温能诱导NDH-1L大量表达，NDH-CET也随之增强。然而NDH-1L高热稳定性的机制尚不清楚。本文通过对集胞藻6803(Synechocystis sp. Strain PCC6803)的研究发现了一个研究 NDH-1L热稳定性的好材料----NdhM less突变体(缺失了约94％的NdhM)；正常情况下突变体中NDH-1L的积累量不受影响，但在热胁迫环境下 NDH-1L在类囊体膜上的积累量减少。通过对该突变体生理、生化等方面的研究，我们发现了 NdhM维持-NDH-1L热稳定性的分子机制。<br>　　本研究主要内容包括：⑴通过分子生物学等手段，构建了-NdhM插入突变体；通过在平板上的整合筛选分别获得了NdhM大部分缺失(NdhM less)和完全缺失(NdhM null)的两种突变体。⑵通过蓝绿温和电泳(BN-PAGE)结合蛋白免疫印迹(Western Blot)等方法，分析了野生型(WT)、NdhM less和NdhM null在正常条件下和热处理条件下其NDH-1L在类囊体膜上的积累量。结果表明仅在热下绝大部分NdhM的缺失损伤NDH-1L在类囊体膜上的积累量。通过体外实验检测用 DM热处理的WT和NdhM less的粗类囊体膜，我们进一步发现，大部分NdhM的缺失严重瓦解了NDH-1L在类囊体膜上的积累。另外，通过检测正常条件和热下WT、NdhM less和NdhM null胞质中NDH-1L的组装中间体(NAIs)，我们发现大部分NdhM的缺失并不影响NAIs的组装。综上所述，我们的研究结果表明绝大部分NdhM的缺失影响了热下 NDH-1L在类囊体膜上的稳定性，从而损伤了NDH-1L在类囊体膜上的积累量。⑶为了揭示NdhM维持NDH-1L热稳定性的分子机制，对NdhM与组成NDH-1L的所有亚基进行了互作鉴定。通过酵母双杂交实验，发现NdhM仅与 NdhK存在蛋白互作。通过 GST-pull down和 Co-IP等实验进一步验证了NdhM特异性地与NdhK存在蛋白互作。此外，通过分析热胁迫环境下WT、NdhM less和ΔndhK藻株中NDH-L所参与的生理生化过程，我们发现在热胁迫条件下NdhM less表现出与ΔndhK类似的生理生化特性。以上实验结果表明NdhM极有可能是通过NdhK维持了NDH-1L在热下的稳定性。