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白花、紫花丹参中丹参酮类成分的差异性及其抗类风湿性关节炎的作用研究

摘要丹参为唇形科植物丹参(Salviamiltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎,是我国传统医药中普遍应用的药物之一,始载于《神农本草经》,是常用的活血化瘀中药。根据花色的不同,丹参分为白花丹参和紫花丹参。丹参酮是其主要化学成分,研究表明丹参酮类化合物具有良好的抗炎功能。本文将首先对白花丹参和紫花丹参中丹参酮类成分进行研究,发现两种花色丹参中丹参酮类成分的差异,然后对白花丹参中丹参酮类化合物进行分离提取及结构鉴定,最后进行丹参酮IIA、丹参酮I和甲基丹参酮的抗炎活性机理研究。<br>  为研究白花丹参和紫花丹参中丹参酮类成分和含量的差异,采用高效液相色谱法(HPLC)进行测定,色谱柱为Agilent XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇和水(含体积比0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,选取十个丹参酮类化合物为对照品,在280nm处测定白花丹参、山东紫花丹参和四川紫花丹参中各丹参酮类成分的含量。结果表明,丹参酮IIA在2.00-100.00μg(Y=40.601X+159.68,r=0.9979)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率RSD为0.46%;丹参酮I在2.00-100.00μg(Y=22.335X+72.957,r=0.9975)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为1.76%;柳杉酚在2.00-100.00μg(Y=30.296X+98.144,r=0.9984)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为2.28%;弥罗松酚在2.00-100.00μ g(Y=6.7841X+27.737,r=0.9982)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为1.37%;隐丹参酮在2.00-100.00μ g(Y=19.936X+72.423,r=0.9981)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为2.09%;丹参新醌 B在2.00-100.00μ g(Y=41.554X+161.46,r=0.9978)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为1.27%;丹参新醇在2.00-100.00μ g(Y=23.688X+64.779,r=0.9984)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为1.98%;鼠尾草酚酮在2.00-100.00μ g&nbsp;(Y=79.323X-66.428,r=0.9999)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为1.93%;二氢丹参酮 I在2.00-100.00μg(Y=52.933X+194.45,r=0.9980)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 RSD为1.86%;甲基丹参酮在2.00-100.00μ g(Y=27.794X+0.392,r=0.9999)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率RSD为1.72%。此方法简便、准确、重现性好。结果表明不同种类丹参中丹参酮类成分含量差异较大,从白花丹参中检测到柳杉酚、丹参新醌B和丹参新醇三种丹参酮类成分,而在紫花丹参中没有检测到这三种成分。<br>  为提取分离到丹参酮类化合物,采用二氯甲烷和甲醇浸提,硅胶柱层析法和凝胶柱层析法分离纯化。以环己烷:二氯甲烷(10:1)混合溶剂溶解丹参酮提取物,湿法上样,洗脱流速为1BV/h,用不同比例的环己烷-二氯甲烷梯度洗脱,洗脱5-6个柱体积。分别得到环己烷-二氯甲烷(10:1)部位,环己烷-二氯甲烷(1:2)部位和纯二氯甲烷部位。以二氯甲烷-甲醇不同梯度洗脱环己烷-二氯甲烷(1:2)部位,得到7个部位(部位FrA—FrG)和四个化合物。其中FrE部位用不同比例的环己烷-二氯甲烷梯度洗脱分离得到两个化合物;FrF部位用不同比例的环己烷-二氯甲烷梯度洗脱和HPLC半制备分离得到两个化合物;FrG部位用不同比例的环己烷-二氯甲烷梯度洗脱分离得到两个化合物。对分离得到的10种丹参酮类化合物进行1HNMR、13CNMR等波谱数据分析,并结合文献和数据库比对,最终确定这10种化合物的化学结构,并使用LC-MS/MS初步确定了一种新化合物的结构。<br>  通过完全弗氏佐剂致敏小鼠,获得类风湿性关节炎模型,以研究丹参酮IIA、丹参酮I和甲基丹参酮的抗炎作用。结果表明造模后各组小鼠之间的足爪肿胀程度相比空白组差异显著,给药后,阳性药组、丹参酮IIA组,丹参酮I组,甲基丹参酮组的小鼠足趾肿胀程度与模型组相比明显减轻;模型组小鼠血清中的 IFN-γ水平明显低于空白组,给药后各组小鼠血清中的IFN-γ水平较模型组升高(P<0.05),&nbsp;模型组小鼠血清中的 IL-4、LTB4、NO水平明显高于空白组,给药后各组小鼠血清中的IL-4、LTB4、NO水平较模型组降低(P<0.05);模型组中的小鼠发现跺关节滑膜组织中出现较多炎性细胞浸润现象。治疗后,该现象明显减轻,软骨破坏程度有所改善。<br>  本课题通过硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化得到11种丹参酮类化合物,对其进行1HNMR、13CNMR等波谱数据分析,确定了10种化合物的结构,使用LC-MS/MS初步确定了一种新化合物的结构,并对其中三种丹参酮类成分做了抗炎活性的考察,为进一步的研究提供科学依据。

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学位信息:
湖北中医药大学 药学 药物分析学(硕士) 2017年
发布时间 2018-01-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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