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摘要目的：目前研究提示腹主动脉瘤（AAA）形成机制包括炎症反应、基质降解和重塑都与活性氧（ROS）有一定程度的关系，线粒体解偶联蛋白2（UCP-2）被认为是抗氧化剂，位于线粒体内膜的阴离子载体，在多个组织都有表达，通过维持活性氧的平衡防止氧化损伤；UCP-2在不同的细胞已经被确定为凋亡抑制基因,主动脉瘤及夹层已被证实存在血管平滑肌细胞凋亡；因此，我们认为UCP-2是一个关键因素,通过抗氧化和抗凋亡抑制AAA的形成。为了确定这一假设，通过UCP-2和载脂蛋白E（ApoE）双基因敲除小鼠测定UCP-2在AAA的病理作用。<br>　　方法：<br>　　1、UCP-2-/-ApoE-/-双敲小鼠由UCP-2-/-与ApoE-/-小鼠杂交产生，PCR法检测基因敲除小鼠的基因分型，DNA样本取自小鼠尾部；<br>　　2、实验分组:野生小鼠(WT)、单基因敲除小鼠（ApoE-/-）、双基因敲除小鼠(UCP-2-/-ApoE-/-)；<br>　　3、腹主动脉瘤造模：选择8周龄雄性小鼠吸入异氟醚麻醉后，将含有血管紧张素Ⅱ（1000ng／kg／min；Sigma）的微型渗透泵（Alzet，2004）置于小鼠背部皮肤下持续4周；<br>　　4、采用qRT PCR和蛋白免疫印迹试验的方法检测WT、ApoE-/-、ApoE-/-+Ang-Ⅱ各组腹主动脉UCP2 mRNA和蛋白的表达情况；<br>　　5、通过HE、VVG、-SMA染色的方法检测小鼠造模4周后腹主动脉外膜增厚、弹性纤维、平滑肌细胞情况；<br>　　6、采用蛋白免疫印迹试验(Western blotting)检测各组MMP2、MMP9炎症因子在腹主动脉瘤的表达;<br>　　7、通过超氧化物阴离子荧光探针（DHE）染色评估活性氧（ROS）水平，用荧光显微镜490nm和590nm发射的激发波长观察。活性氧ROS的荧光强度用ImageJ图像处理软件进行定量；通过NADPH氧化酶活性、丙二醛（MDA）浓度和超氧化物歧化酶（SOD）活性测定氧化应激水平，组织匀浆用二亚苯基碘(DPI)检测NADPH氧化酶活性，硫代巴比妥酸（TBA）检测丙二醛，硝基四氮唑蓝（NBT）检测SOD活性；<br>　　8、TUNEL法检测腹主动脉瘤细胞凋亡情况，在细胞凋亡过程中，会激活一些DNA酶使基因组DNA断裂，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）的催化下结合绿色荧光探针的荧光素（FITC）标记的dUTP，通过荧光显微镜检测到；<br>　　半胱天冬酶-3（caspase3）是参与执行细胞凋亡的一个关键酶，在凋亡的早期阶段被激活，裂解相应的胞核底物，最终导致细胞凋亡。通过caspase3蛋白免疫印迹检测表达；<br>　　结果：<br>　　1、实验结果提示UCP-2 mRNA及蛋白的表达在Ang-Ⅱ诱导的ApoE-/-造模小鼠均明显增高，表明腹主动脉瘤UCP-2的表达变化发生在翻译和转录水平；<br>　　2、通过血管紧张素Ⅱ处理后，UCP-2-/-ApoE-/-双敲小鼠腹主动脉瘤的发生率（83.9％，26 of31)明显高于UCP-2+/+ApoE-/-小鼠(55%,11 of20)，并且UCP-2-/-ApoE-/-小鼠主动脉明显扩张，组织学研究显示腹主动脉外膜肥厚，弹性纤维断裂和平滑肌细胞减少；<br>　　3、通过荧光染料DHE染色检测，UCP-2-/-ApoE-/-双敲小鼠主动脉活性氧增加，UCP-2-/-ApoE-/-双敲小鼠NADPH氧化酶活性和MDA水平明显高于UCP-2+/+ApoE-/-或野生型小鼠，此外，UCP-2+/+ApoE-/-小鼠与野生型小鼠相比SOD活性增加，而UCP-2-/-ApoE-/-双敲小鼠SOD活性增加减少，表明UCP-2对血管紧张素-Ⅱ诱导的氧化应激和腹主动脉瘤形成起保护作用。研究结果还表明UCP-2基因敲除上调主动脉瘤MMP2和MMP9的表达；<br>　　4、TUNEL法检测细胞凋亡，结果发现在UCP-2-/-ApoE-/-小鼠中Ang-Ⅱ诱导VSMCs凋亡增加，并且在UCP-2-/-ApoE-/-小鼠血管组织caspase-3蛋白表达明显增加；<br>　　结论：研究表明，在血管紧张素Ⅱ诱导的腹主动脉瘤造模小鼠中，UCP-2 mRNA及蛋白的表达均明显增高，缺乏UCP-2通过增加活性氧水平与血管平滑肌细胞凋亡，增加腹主动脉瘤易感性及严重程度，表明UCP-2可以作为被抗氧化剂和抗凋亡因素预防腹主动脉瘤。