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摘要背景<br>　　支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病。大量研究表明，支气管哮喘与高凝状态密切相关，哮喘炎症与凝血功能紊乱相互作用，共同促进支气管哮喘发生发展。<br>　　组织因子（tissue factor，TF）是外源性凝血途径的重要启动子，也是连接凝血与炎症网络系统的关键分子。TF除了其促凝活性，还可与相应配体结合，激活脉管系统中炎症信号转导通路。反过来，炎症因子可促进上皮细胞和单核细胞表达 TF。研究表明，哮喘患者血浆 TF含量和活性升高，加重哮喘病情，促进气道重塑。尽管如此，TF在支气管哮喘凝血与炎症过程中的作用机制仍需大量研究进行阐明。<br>　　凝血酶敏感蛋白-1（thrombospondin-1，TSP-1）是血小板α颗粒中的糖基质蛋白。在炎症因子的诱导下，TSP-1可由巨噬细胞、单核细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、上皮细胞等多种细胞分泌释放至血液循环，参与血小板黏附与聚集，在血栓性疾病中发挥重要作用。TSP-1可诱导巨噬细胞趋化至炎性部位，进一步促进炎症反应。研究表明，TSP-1在多种肺疾病如慢性阻塞性肺疾病、慢性肺心病中异常表达，但其在支气管哮喘中的研究较少。<br>　　肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样因子2（tumor necrosis factorαinduced protein-8 like-2，TIPE2）是新近发现的免疫负性调节分子，主要表达在免疫细胞如淋巴细胞和巨噬细胞，其在调节免疫平衡和炎症反应方面发挥重要作用。研究表明， TIPE2在儿童哮喘患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells， PBMCs）中表达下降，在脐静脉内皮细胞中TIPE2可通过p38MAPK以及ERK1/2信号通路调节TF的表达。但在哮喘中TIPE2与凝血物质之间的关系尚未明确。本研究旨在探讨哮喘患者PBMCs中TIPE2、TF及血浆中TF、TSP-1的表达情况及TIPE2与凝血物质TF、TSP-1的相关性。此外，由于屋尘螨是最常见、危害最大的室内变应原，是哮喘在世界范围内的重要发病原因。且血源性TF主要来源于单核细胞，单核细胞来源的 TF微粒活性最强。 TIPE2、TF在一定条件下均可在单核细胞中表达。因此我们选取单核细胞系 THP-1细胞作为载体，探讨屋尘螨提取液（house dust mite extract，HDME）刺激下THP-1细胞中TIPE2和TF的表达及相关机制。<br>　　目的<br>　　研究TIPE2与支气管哮喘患者凝血物质TF、TSP-1的相关性；并进一步探讨屋尘螨提取液刺激的THP-1细胞中TIPE2和TF的表达及相关信号通路变化，为支气管哮喘的诊断和治疗提供新思路。<br>　　材料与方法<br>　　1.收集2015年12月~2016年6月郑州大学第一附属医院门诊及住院确诊的支气管哮喘患者65例作为病例组，同时纳入同时期年龄、性别差异无统计学意义的健康体检者40例作为健康对照组。<br>　　2.采用Western blot检测哮喘病例组和健康对照组PBMCs中TIPE2、TF蛋白表达水平。<br>　　3.采用ELISA检测哮喘患者和健康者血浆中TF、TSP-1的表达水平。<br>　　4.采用RT-PCR检测屋尘螨提取液刺激THP-1细胞后，THP-1细胞中TIPE2、TF mRNA的表达水平。<br>　　5.采用 western blot检测屋尘螨提取液刺激 THP-1细胞后，p38MAPK、NF-κB信号通路蛋白的变化情况。<br>　　结果<br>　　第一部分支气管哮喘患者TIPE2与TF、TSP-1中的表达及相关性研究<br>　　1.与健康对照相比，哮喘患者PBMCs中TIPE2蛋白表达水平降低（p<0.01）， TF蛋白表达水平明显升高（p<0.01）。<br>　　2.与健康对照相比，哮喘患者血浆中TF、TSP-1蛋白表达水平均明显升高（p<0.01）。<br>　　3.支气管哮喘患者PBMCs中TIPE2蛋白表达水平与PBMCs和血浆中TF蛋白表达水平均呈负相关（r=-0.3828，p<0.01；r=-0.5422，p<0.01）。此外，PBMCs中TIPE2蛋白表达水平与患者血浆中TSP-1蛋白表达水平呈负相关（r=-0.3013， p<0.05）。<br>　　第二部分屋尘螨提取液刺激THP-1细胞后TIPE2、TF的表达及p38MAPK/NF-κB信号通路变化研究<br>　　1.不同浓度（0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml）屋尘螨提取液刺激THP-1细胞4h后，TIPE2 mRNA相对表达量降低，TF mRNA相对表达量升高（p<0.05），且在刺激浓度1μg/ml时变化最为明显（p<0.05）。选用1μg/ml屋尘螨提取液刺激THP-1细胞不同时间（1h，2h，4h，8h）后，TIPE2 mRNA相对表达水平下降（p<0.05），TF mRNA相对表达水平升高（p<0.05），且在刺激4h时最为显著（p<0.05）。<br>　　2.1μg/ml屋尘螨提取液刺激THP-1不同时间后（0min，15min，30min，1h）， p38MAPK、NF-κB蛋白磷酸化水平随着时间的增加表达逐渐增高，且在1h时升高最明显。<br>　　结论<br>　　1.哮喘患者PBMCs中TIPE2蛋白表达水平降低、TF蛋白表达水平升高，血浆中TF、TSP-1蛋白水平升高。哮喘患者PBMCs中TIPE2与凝血物质TF、TSP-1水平呈负相关。提示TIPE2可能通过与TF、TSP-1相互作用参与哮喘患者高凝状态。<br>　　2.初步证实屋尘螨提取液可诱导THP-1中TIPE2 mRNA表达水平降低，TF mRNA表达水平升高，且可引起THP-1细胞中p38MAPK、NF-κB蛋白磷酸化信号增强。