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摘要背景:<br>　　神经病理性疼痛( Neuropathicpain，NPP)定通常指中枢或外周神经系统的损坏及功能失调引起的异常疼痛，NPP属于慢性疼痛的一种，主要临床表现为痛觉过敏、感觉异常、自发性疼痛和异常疼痛等。其发病率高，疼痛治疗的整体效果不佳，因此探究神经性疼痛的发病机制，为疼痛治疗提供可靠依据将具有重要医学价值。<br>　　糖皮质激素受体（Glucocorticoid receptor, GR）是重要的核转录因子。GR激活后进入细胞核内与特定的DNA序列（糖皮质激素反应元件）结合在一起，进而正调控或负调控靶基因的表达，参与不同的生物效应和多种生理、病理过程[1,2]。近年来，越来越多证据表明中枢糖皮质激素受体GR可能参与中枢痛敏形成及伤害性信息的传递，但具体机制不明确[3,4]。众所周知，中枢活化的小胶质细胞通过合成与释放疼痛及炎性相关介质(如COX2、IL－6、TNF-α等)，作用于神经元或者邻近的胶质细胞，近而增强痛觉传递神经元敏感性和反应性，引发持续性的神经病理性疼痛。已有报道证实GR广泛表达与中枢神经系统，并且可参与免疫炎症反应，那么神经病理性疼痛中，GR与活化的小胶质细胞中有怎样的作用关系呢？<br>　　研究发现神经损伤诱发的异常性疼痛依赖于p38 MAPK信号通路,并且活化的p38 MAPK仅表达在激活的小胶质细胞[5]。本实验拟通过坐骨神经分支选择性损伤模型（sparednerveinjury, SNI）早期鞘内给予p38 MAPK抑制剂，检测神经病理性疼痛中小胶质细胞p38 MAPK信号通路对GR的调控。然后再给予GR的抑制剂，用于探索GR对下游转录因子核因子κB(NF-κB)及促炎因子的调控。由此重点研究GR参与神经损伤诱导的神经病理性疼痛的发生发展的分子机制，为神经病理性疼痛的治疗提供新的实验依据。<br>　　目的:<br>　　（1）建立SNI大鼠神经病理性疼痛模型，观察SNI术后大鼠脊髓机械痛行为和脊髓GR蛋白表达变化。<br>　　（2）通过蛛网膜下腔注射SB203580阻断p38MAPK通路，利用RU38486抑制掉GR的功能，分别检测给药后机械痛行为和GR、磷酸化NF-κB（pNF-κB）的表达变化。以此探索神经病理性疼痛中p38MAPK信号通路通对GR和pNF-κB的调控。<br>　　（3）鞘内给予GR的激动剂DEX，检测 SNI大鼠痛行为的变化及pNF-κB表达变化，进一步验证在神经病理性疼痛中GR对下游转录因子NF-κB的调控。<br>　　材料和方法:<br>　　（1）建立 SNI大鼠动物模型[6]，检测模型的成功及大鼠脊髓 GR蛋白变化<br>　　将实验用大鼠按照随机表法分组，每组12只：正常组（normal组），手术模型组（SNI组），假手术对照组（sham组），SB203580注药组（SNI+SB203580组)，单纯溶质组（SNI+Vehicle组，n=12)；假手术注射溶剂组（sham+Vehicle组），模型组给予溶剂组（SNI+Vehicle组，n=10）SB203580和RU38486联合注药组（SNI+SB203580+RU38486），地塞米松处理组（SNI+DEX组）。手术组剥离皮下组织，使坐骨神经及三个分支充分暴露，分别从两端结扎腓总神经、胫神经并剪掉两个结扎位点中间部分。sham组只暴露坐骨神经，而不做结扎处理。Von frey检测大鼠机械痛时程变化，确定模型成功；酶联免疫吸附检测(ELisa)检测大鼠血浆皮质酮的变化；Western-blot检测大鼠脊髓GR、磷酸化p38（p-p38）和磷酸化 NF-κB（pNF-κB）的表达；免疫荧光化学检测脊髓 GR与小胶质细胞标记物是否共标。<br>　　（2）检测神经病理性疼痛中p38对GR的调控<br>　　术后早期通过蛛网膜下腔注射SB203580阻断p38MAPK通路，检测对大鼠机械痛行为影响；Western-blot和免疫荧光技术检测下游转录因子 pNF-κB表达变化；ELisa检测大鼠血清促炎因子IL－6、TNF-α的变化。在此基础给予RU38486抑制掉GR的功能，观察该现象是否被GR受体阻滞剂RU38486逆转。<br>　　（3）检测神经病理性疼痛中GR对磷酸化NF-κB的调控<br>　　SNI术后立即通过蛛网膜下腔注射DEX激活GR的表达，检测机械痛行为及pNF-κB和促炎因子IL－6、TNF-α的变化，行为学观察激活GR后是否逆转了神经损伤诱导的痛行为，Western-blot和 ELisa分别检测 pNF-κB和促炎因子IL－6、TNF-α的改变。<br>　　结果:<br>　　1. SNI动物模型制作成功。与sham组相比， SNI模型组大鼠术后3d、7d、14d、21d和28d时间点，机械痛阈降低，模型建立成功。Western-blot检测与sham组相比，SNI组脊髓GR表达逐渐降低，p-p38和pNF-κB表达增加。免疫荧光双标技术检测GR在小胶质细胞、神经元、星形胶质细胞均有表达。<br>　　2. Western-blot，免疫荧光结果显示：SNI大鼠术后立即连续7 d鞘内注射SB203580后，大鼠脊髓p-p38、pNF-κB表达降低，而GR表达水平提高，Elisa检测到血清促炎因子水平降低；而鞘内注射RU38486抑制GR的表达，结果逆转了SNI+SB203580组疼痛缓解的局势及pNF-κB和促炎因子IL－6、TNF-α高表达的现象。<br>　　3. SNI大鼠于术后早期鞘内注射DEX上调GR的表达，结果显示与未给药SNI组相比，SNI+DEX组大鼠疼痛缓解，脊髓pNF-κB的表达增高，促炎因子IL－6、TNF-α的表达降低。Western-blot，免疫荧光结果显示GR负调控pNF-κB的表达。<br>　　结论:<br>　　1.在神经病理性疼痛的早期中，脊髓小胶质细胞p38MAPK信号通路活化通过下调GR的表达促进疼痛的发生、发展。<br>　　2.在神经病理性疼痛中，激活的GR能够通过抑制脊髓NF-κB的磷酸化及促炎因子IL-6和TNF-α的表达水平而缓解疼痛。