摘要目的:⑴了解本地VVC患者念珠菌感染的菌种分布情况及其对FCA的敏感性;⑵探讨VVC患者临床分离白念珠菌Mrr2突变与FCA耐药的关系;⑶探讨VVC患者临床分离白念珠菌Mrr2、CDR1的mRNA表达水平与FCA耐药的关系,并进一步分析Mrr2与CDR1表达水平在FCA耐药中的相互调控作用;⑷探讨VVC患者临床分离白念珠菌Mrr2基因突变与Mrr2的mRNA表达水平是否对FCA耐药具有相互作用。<br> 方法:采集2015年11月至2016年5月山西医科大学第二医院皮肤性病科就诊的可疑VVC患者阴道分泌物标本155份,并经过真菌镜检、CHROMagar念珠菌显色培养基及API20C AUX念珠菌鉴定系统进行菌种鉴定,获得102株念珠菌。对其中的80株白念珠菌应用M27-A3微量肉汤稀释方法进行FCA药物敏感性试验。对80株白念珠菌分别提取DNA、聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增Mrr2基因片段、测序,寻找突变位点。对白念珠菌FCA耐药组和敏感组菌株分别提取总 RNA,逆转录合成 cDNA,实时荧光定量 PCR(Real-time Fluorescence Quantitative PCR,FQ-RT-PCR)检测Mrr2、CDR1的mRNA表达量,并做相关统计学分析。<br> 结果:①从155份阴道分泌物标本中,共获得念珠菌菌株102株。其中白念珠菌80株(78.4%),光滑念珠菌15株(14.7%),热带念珠菌4株(3.9%),近平滑念珠菌2株(2.0%),克柔念珠菌1株(1.0%)。②对80株白念珠菌接种活化,并使用M27-A3微量肉汤稀释法进行FCA药物敏感性试验,结果显示:80株白念珠菌中有40株对FCA敏感,10株对FCA呈剂量依赖性敏感,30株对FCA耐药,耐药率为37.5%。③对80株白念珠菌的Mrr2基因进行测序,其中FCA耐药组Mrr2基因突变率为56.67%;FCA敏感组Mrr2基因突变率为26.08%。对白念珠菌Mrr2基因突变与FCA耐药的关系采用四格表卡方检验,得出P值<0.05,差异具有统计学意义。耐药组Mrr2基因突变率高于敏感组Mrr2的突变率。④检测白念珠菌FCA敏感组和耐药组的Mrr2及CDR1的mRNA表达水平,经统计学分析:白念珠菌FCA耐药组Mrr2的mRNA表达水平高于敏感组Mrr2的mRNA表达水平(1.10±0.50 VS0.52±0.45),P<0.05,差异具有统计学意义;白念珠菌FCA耐药组CDR1的mRNA表达水平高于敏感组CDR1的mRNA表达水平(0.42±0.294 VS0.25±0.289),P<0.05,差异具有统计学意义;CDR1与Mrr2呈正相关,r=37.6%;Mrr2突变与 Mrr2表达的交互作用分析,发现Mrr2基因发生突变且高表达组的耐药性是基因未发生突变且基因低表达组的耐药性的47.50倍,说明Mrr2基因突变与高表达对FCA耐药性的产生存在协同作用。<br> 结论:⑴本地区VVC患者最主要的致病菌种是白念珠菌,对FCA耐药率较高,临床治疗VVC应依据药敏试验结果,选用敏感抗真菌药物进行精准治疗。⑵VVC患者临床分离白念珠菌FCA耐药性可能与Mrr2突变有关。⑶CDR1高表达可能直接导致白念珠菌对FCA耐药;Mrr2高表达可能直接导致白念珠菌对FCA耐药,且Mrr2高表达还可促进CDR1高表达进而介导白念珠菌对FCA耐药。⑷Mrr2基因突变与高表达对FCA耐药性的产生可能存在协同作用。
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