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摘要类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种以滑膜异常增生、炎性细胞浸润以及软骨或骨的破坏为特点的慢性自身免疫病。目前改善病情抗风湿药(disease-modifying anti-rheumatic drugs， DMARDs）多药耐药性(multiple drug resistance，MDR）的产生是影响RA治疗的新的关键因素。众多研究发现ABC跨膜转运蛋白家族所介导的细胞内药物排出增加是多药耐药性产生的主要机制之一，其中ABC跨膜转运蛋白家族成员ABCB1即多药耐药基因1（MDR1）编码的P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）参与了众多DMARDs药物的排出。<br>　　我科依据细胞增殖动力学原理，采用甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）周期联合环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）作为治疗RA的新方法，20年的临床实践及系列临床与基础研究证实其远期疗效明显好于单用药组及其他联合方案，可延缓甚至部分逆转骨质破环，且不良反应少，安全性高。我们的前期耐药研究已经证实：1.RA患者各实验组外周血淋巴细胞中P-gp表达水平升高与RA难治程度相关，且与炎性指标（血沉、C-反应蛋白）及疾病活动度（DAS28）相关，证实了其参与了多药耐药的形成。2.在不同治疗组P-gp表达水平的比较中，联合用药组较单用药组P-gp表达水平减少，MTX/LEF周期联合CTX一定程度逆转P-gp表达。3.在IL-6刺激后，RA患者外周血淋巴细胞上P-gp的表达和功能均明显增强，并且呈一定的时间及浓度依赖性。4.IL-6通过ERKl／2、JAK2-STAT3信号通路调控RA患者外周血淋巴细胞 P-gp的表达和功能。目前MTX联合CTX逆转P-gp的表达的具体机制尚不明确，其逆转耐药是否与IL-6介导的JAK2-STAT3通路有关？是本课题的科学问题。<br>　　JAK-STAT信号转导通路主要由三个成分组成，即酪氨酸激酶相关受体、酪氨酸激酶（Janus Kinase，JAK)、信号转导子和转录激活子（Signal transducers and activators of transcription，STAT）。多种细胞因子共用该信号传导通路参与细胞的分化、增殖、凋亡以及免疫调节等多种重要的生物学功能。其中JAK2-STAT3是JAK-STAT家族的重要信号转导通路，并且参与了RA的病理生理过程。本课题在前期研究的基础上，探究RA患者MTX联合CTX逆转P-gp的表达是否与JAK2-STAT3通路有关，明确MTX联合CTX逆转P-gp表达的具体作用机制。<br>　　目的：<br>　　通过在体外RA外周血淋巴细胞培养体系中加入IL-6、不同浓度的MTX、CTX的体外活性物质4-氢过氧环磷酰胺（4-Hydroperoxycyclophosphamide，4-HC）共培养72h，观察各组淋巴细胞P-gp、JAK2、STAT3的表达情况，明确MTX联合CTX逆转IL-6介导P-gp表达的具体作用机制。<br>　　方法：<br>　　选取未经任何DMARDs及生物制剂治疗RA患者15例。用肝素抗凝管采集入组患者外周血20ml，提取外周血淋巴细胞，建立淋巴细胞培养体系，分为空白组、IL-6组、MTX低+IL-6组、MTX中+IL-6组、MTX高+IL-6组、CTX+IL-6组、MTX低+CTX+IL-6组，置于37℃5％C02细胞培养箱中培养72h，流式细胞术检测外周血淋巴细胞 P-gp的表达水平，RT-PCR方法检测外周血淋巴细胞P-gp、JAK2、STAT3的mRNA水平。<br>　　结果：<br>　　1.流式细胞术检测各RA培养组外周血淋巴细胞P-gp表达水平：与空白对照组相比，IL-6组P-gp表达水平明显升高（P<0.01）；与IL-6组相比，各处理组P-gp表达均降低，MTX高+IL-6组、CTX+IL-6组、MTX低+CTX+IL-6组降低差异有统计学意义（P<0.05），且MTX低+CTX+IL-6组降低最明显（P<0.01）；MTX低+CTX+IL-6组较MTX低+IL-6组降低差异有统计学意义（P<0.05）。<br>　　2. RT-PCR检测各RA培养组外周血淋巴细胞P-gp mRNA水平：与空白对照组相比，IL-6组P-gp mRNA水平明显升高（P<0.01）；与IL-6组相比，各处理组P-gp mRNA水平均降低，MTX高+IL-6组、CTX+IL-6组、MTX低+CTX+IL-6组降低差异有统计学意义（P<0.05），且MTX低+CTX+IL-6组降低最明显（P<0.01）；MTX低+CTX+IL-6组较MTX低+IL-6组降低差异有统计学意义（P<0.05）。<br>　　3. RT-PCR检测各RA培养组外周血淋巴细胞JAK2、STAT3 mRNA水平：与空白对照组相比，IL-6组JAK2、STAT3 mRNA水平明显升高（P<0.01）；与IL-6组相比，各处理组JAK2、STAT3 mRNA均降低，MTX高+IL-6组、CTX+IL-6组、MTX低+CTX+IL-6组降低差异有统计学意义（P<0.05），且MTX低+CTX+IL-6组降低最明显（P<0.01）；MTX低+CTX+IL-6组较MTX低+IL-6组降低差异有统计学意义（P<0.05）。<br>　　结论：<br>　　1.炎性细胞因子IL-6可以明显上调RA患者外周血淋巴细胞跨膜转运蛋白P-gp的表达。<br>　　2. MTX联合小剂量的CTX逆转耐药可能通过抑制JAK2-STAT3通路下调IL-6诱导的RA患者外周血淋巴细胞 P-gp的表达。