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摘要第一部分:化学成分明确的无饲养层培养基定向诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究<br>　　研究目的:<br>　　以E8培养基培养人胚胎干细胞（human embryonic stem cell，ESCs），探索化学成分明确的 CDM3诱导分化培养基在人 ESCs定向心肌细胞分化中的作用及最佳细胞接种密度。<br>　　研究方法:<br>　　人ESCs细胞复苏后传代3次，接种至铺有生长因子减量的Matrigel胶上，待细胞汇合度达90%左右时，换用CDM3诱导分化培养基，诱导分化的d0-d2加入6umol/L CHIR99021，d3-d4加入2umol/L Wnt-59，之后单用CDM3培养基，直至开始出现跳动的心肌细胞，诱导分化过程中观察细胞形态及跳动心肌细胞数量的变化。再分别以0.5×104、1×104、1.5×104、2×104个/cm2的接种密度分别进行诱导分化实验，观察不同接种密度ESCs定向心肌细胞诱导分化的效率。<br>　　研究结果:<br>　　诱导d7开始出现跳动的细胞，跳动细胞数量d7-d16逐渐增加，d16达高峰。细胞免疫荧光结果显示：跳动细胞心肌特异性标志物a-Actinin、cTNNT2表达阳性，并可见明显的肌节及润盘结构；ESCs接种密度为0.5×104个/ cm2时不能成功诱导为心肌细胞，接种密度为2×104个/cm2的诱导效率较密度为1×104、1.5×104个/cm2者低。<br>　　结论:<br>　　CDM3诱导分化培养基可以成功诱导人 ESCs定向分化为心肌细胞，1-1.5×104个/cm2为诱导分化的最佳接种密度。<br>　　第二部分:人胚胎干细胞定向心肌分化过程中APJ表达特征的研究<br>　　研究目的:<br>　　人ESCs定向心肌分化过程中，以中胚层阶段、心肌细胞起始分化阶段、心肌细胞后分化阶段为时间节点，探索APJ的表达特征。<br>　　研究方法:<br>　　经单层培养后，应用化学成分明确的诱导分化培养基定向诱导人ESCs向心肌细胞分化，于中胚层阶段（d2）、心肌细胞起始分化阶段（d3）、心肌细胞后分化阶段(d7)分别进行细胞免疫荧光检测，共聚焦显微镜观察Brachyury T、mesp1、Nkx2.5与APJ的蛋白表达情况，实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）法检测四种标志物mRNA的表达水平。<br>　　研究结果:<br>　　诱导d7开始出现跳动的细胞，跳动细胞数量d7-d16逐渐增加，d16达高峰。细胞免疫荧光结果显示： APJ在 d2、d3、d7三个阶段分别与阶段特异性标志物Brachyury T、mesp1、Nkx2.5共表达。APJ mRNA在三个阶段中呈持续性表达，中胚层起始时表达最高，中胚层后表达逐渐降低。<br>　　结论:<br>　　APJ与代表人ESCs心肌分化过程中阶段特异性标志物Brachyury T、mesp1、Nkx2.5共表达，证实APJ在人心肌细胞发育的整个过程中持续性表达。