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摘要辅酶Ⅱ依赖性视黄醛脱氢还原酶（NRDR）是从兔肝中发现并纯化的一种酶，能有效地氧化视黄醇与还原视黄醛。视黄醇在体内经两步代谢生成维甲酸，其中间代谢产物为视黄醛。视黄醛的合成反应是体内维甲酸合成的限速步骤，因此N RDR在维持生物体内维甲酸的平衡过程中起着重要作用。NRDR也在人以及其他哺乳动物中普遍表达，由DHRS4基因编码。其除参与维甲酸代谢外，对类固醇激素、α-双羰基化合物等也具有催化活性。<br>　　全反式维甲酸是维生素A的代谢产物，是脊椎动物体内重要的生物活性物质，通过与其核内受体结合调节基因的转录参与细胞生长、分化、形态发生和免疫调节等生理过程。临床上，维甲酸类化合物已广泛应用于预防及治疗一些恶性肿瘤，包括乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌和早幼粒细胞白血病等。体内维甲酸类化合物的平衡受饮食及其相关代谢酶等因素的影响，但其在体内具体的调控机制仍有待研究。<br>　　成簇的、规律间隔的短回文重复（CRISPR，Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）是一种来自细菌降解外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统需要CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，Cas9蛋白含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。crRNA（CRISPR-derived RNA）与tracrRNA（trans-activating crRNA）通过碱基配对结合形成tracrRNA/crRNA复合物，该复合物能够引导核酸酶Cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。通过人为设计这两种特殊的RNA，我们可以合成具有引导作用的sgRNA（singleguide RNA），从而引导Cas9蛋白对DNA进行定点切割。<br>　　我们实验室在DHRS4基因结构、转录调控及其表达产物NRDR蛋白功能方面进行了大量细致的研究工作，取得了一定的成果。目前亟需建立DHRS4或NRDR敲除的细胞和动物模型。本课题利用CRISPR/Cas9技术，建立了敲除DHRS4的宫颈癌HeLa细胞。研究中发现，NRDR的缺失对HeLa细胞的增殖有明显影响。在获得单克隆细胞的基础上，后续研究可以进一步验证基因敲除后对肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。这一细胞模型的建立也将为今后研究工作的深入开展奠定基础。