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HA/CD44、Nanog、STAT3在卵巢癌中的相互作用以及三者对MDR1蛋白表达的影响

摘要目的:探讨卵巢癌SKOV-3细胞中HA/CD44及Nanog的表达对于STAT3基因表达的作用,以及三者的表达对于MDR1蛋白的影响。<br>  方法:(1)检测卵巢癌SKOV-3细胞核中STAT3蛋白的表达。培育卵巢癌SKOV-3细胞,SKOV-3细胞培养液中添加HA培养24小时;添加抗CD44抗体培养1小时后,再添加HA继续培养24小时。收集细胞并裂解,提取细胞核部分,经western blot方法检测细胞核中STAT3蛋白的表达。(2)检测卵巢癌SKOV-3细胞中Nanog对STAT3 mRNA表达的影响。在培养液中分别添加 HA培养24小时;添加抗CD44抗体培养1小时后,再添加HA培养24小时;添加 Nanog siRNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养24小时;添加Nanog cDNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养24小时。收集细胞并提取总RNA,应用定量PCR检测STAT3 mRNA的含量。(3)检测卵巢癌SKOV-3细胞中MDR1蛋白表达的调节。SKOV-3细胞培养液中添加HA培养24小时;添加抗CD44抗体培养1小时后,再添加HA继续培养24小时;添加Nanog siRNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养24小时;添加Nanog cDNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养24小时;添加STAT3 siRNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养24小时。收集细胞并提取总蛋白,经western blot方法检测MDR1蛋白的表达。<br>  结果:添加抗CD44抗体后的SKOV-3细胞与仅添加HA组细胞核中的STAT3蛋白的相对含量分别为0.8271±0.0129,1.2984±0.0274,空白对照组的相对含量为1.0659±0.0085。仅经过HA培养的SKOV-3细胞核中STAT3蛋白的表达量约为经过抗CD44抗体处理组的1.5倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、添加HA、添加抗CD44抗体、添加Nanog siRNA转染和添加Nanog cDNA转染的卵巢癌SKOV-3细胞中 STAT3 mRNA的相对含量分别为2.0183±0.0849、2.4111±0.3856、1.0938±0.2045、1.6624±0.1938、6.5091±0.7458,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。MDR1蛋白在空白对照组、添加HA组、添加抗CD44抗体组、Nanog siRNA转染组、Nanog cDNA转染组、STAT3 siRNA转染组中的平均相对含量分别为0.6334±0.0074、0.8701±0.0241、0.4695±0.0331、0.2982±0.0151、1.1149±0.0498、0.1388±0.0224,各组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。<br>  结论:在卵巢癌SKOV-3细胞中HA/CD44以及Nanog表达的上调可增强STAT3的表达和活化,并且三者能够调控卵巢癌细胞中MDR1蛋白的表达。

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