检索历史 清除

摘要目的：<br>　　研究单独使用雷公藤红素、顺铂及两药联合对U-2骨肉瘤(Osteosarcoma， OS)细胞的增殖、凋亡的影响，并对其可能的凋亡机制进行探讨。<br>　　方法：<br>　　MTT比色法分别检测雷公藤红素（1,2,3,4,5μM）、顺铂（2,4,6,8,10μg/ml）单独及两药联合作用24、36、48h后对U-2OS细胞增殖的影响,并计算雷公藤红素与顺铂联合作用U-2OS细胞48h的联合指数；流式细胞技术分别检测半数抑制浓度的雷公藤红素、顺铂单独及两药联合作用48h后对U-2OS细胞凋亡的影响；Hoechst33258染色荧光倒置显微镜下分别观察半数抑制浓度的雷公藤红素、顺铂单独及两药联合作用48h后对 U-2OS细胞的形态变化；Western blot检测U-2OS细胞凋亡相关蛋白Bcl-2, Bax, caspase-3, caspase-8, caspase-9, cytochrome c, CHOP, GRP78和 PARP的表达情况。<br>　　结果：<br>　　MTT法结果显示，雷公藤红素（1,2,3,4,5μM）、顺铂（2,4,6,8,10μg/ml）及两药联合使用均可抑制U-2OS细胞的增殖，以联合用药尤为显著，其抑制效果和药物浓度和药物作用时间呈正相关。在IC10-IC70浓度范围内，两药联合用药的联合指数为0.80-0.97，具有协同作用。流式细胞技术检测提示，半数抑制浓度的雷公藤红素、顺铂及两药联合作用U-2OS细胞48h后，其凋亡率分别为：30.2±2.3％，25.1±2.4%，43.0±2.1%，明显高于对照组7.9±1.4%；Hoechst33258染色荧光倒置显微镜下观察发现三个实验组 U-2OS细胞内均出现明显的核浓缩、核膜核仁破碎等典型的细胞凋亡形态变化，其中以联合用药组凋亡细胞数量最多；Western blot检测发现Bax, cytochrome c, caspase-9， caspase-3, and CHOP表达量升高，Bcl-2, PARP and GRP78表达量下降，而caspase-8表达量无明显变化。caspase-3出现显著剪切活化， PARP被剪切降解。<br>　　结论：<br>　　单独使用雷公藤红素、顺铂及两药联合作用均可明显抑制U-2OS细胞增殖，并可通过线粒体凋亡途径及内质网途径诱导U-2OS细胞凋亡。