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摘要研究背景及目的：<br>　　肝内胆管细胞癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma，ICC)是位于肝细胞癌之后的第二大原发性肝脏恶性肿瘤，约占原发性肝脏恶性肿瘤的10-15％。虽然ICC诊断及治疗方法发展迅猛，但是ICC患者的预后依然不良。导致ICC预后不良的最主要原因是肿瘤局部侵袭、血管、淋巴管转移以及较难进行根治性手术。因此，特异性标记物的发现对临床上早期诊断、早期治疗ICC和评估ICC生存预后具有重要意义。<br>　　CHD1L(Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein1-like gene)是从人肝癌细胞的染色体1q21区分离的致癌基因，其编码的蛋白由两个解旋酶区域、一个C端宏功能域、核定位序列和两个磷酸化位点组成。CHD1L属于SNF2-类家族，在DNA修复、维持染色体的稳态和转录调节中扮演重要作用。多项研究发现，CHD1L在肝癌、乳腺癌、胃癌等多种恶性实体瘤中呈过表达，且与肿瘤迁移和侵袭有关。但其在ICC的侵袭和转移中的作用尚不清楚。<br>　　本课题目的是通过探讨CHD1L基因在ICC组织及其细胞系中的表达水平和CHD1L与患者临床病理因素和生存预后的关系，并通过干扰CHD1L的表达等方法探讨其对ICC细胞系RBE增殖、迁移和侵袭的作用。<br>　　方法：<br>　　1、应用免疫组化检测80例ICC组织和30例癌旁组织切片中CHD1L的表达情况，并分析CHD1L的表达与ICC患者临床病理因素及生存预后的关联。<br>　　2、采用Western Blot和qRT-PCR法检测4种ICC细胞系（RBE、HCCC-9810、HUCCT1、QBC939）和正常肝内胆管细胞HIBEpic中CHD1L蛋白和mRNA的表达。<br>　　3、构建干扰质粒CHD1L-RNAi，干扰ICC细胞系RBE中CHD1L的表达后，用Western Blot法检测CHD1L蛋白表达水平的变化；然后利用CCK-8法、平板克隆形成实验、细胞划痕、Transwell迁移和侵袭实验检测RBE增殖、迁移和侵袭的变化。<br>　　4、统计学分析：应用SPSS19.0统计软件，计量资料采用（-x±S）表示，合理运用配对t检验、卡方检验、生存分析及Cox回归分析等统计方法，以P＜0.05表示差异有统计学意义。<br>　　结果：<br>　　1、免疫组化检测了80例ICC组织和30例癌旁组织切片CHD1L的表达情况，发现CHD1L主要表达在细胞核内，和正常肝胆管组织相比，在癌组织中呈高表达；CHD1L表达与ICC患者的分化程度（P=0.011）、血管侵犯（P=0.002）、淋巴结转移（P=0.008）和TNM分期（P=0.001）指标显著相关，差异具有显著性（P＜0.05）。生存曲线分析表明CHD1L高表达的患者预后不良，且Cox单因素及多因素比例风险回归模型分析表明CHD1L是ICC患者独立的预后标志。<br>　　2、与正常肝内胆管细胞HIBEpic相比，CHD1L蛋白和mRNA在ICC细胞中的表达均上调，尤其是在ICC细胞系RBE。<br>　　3、转染干扰质粒CHD1L-RNAi，下调ICC细胞系RBE中CHD1L的表达后，ICC细胞系RBE的增殖、迁移和侵袭能力下降。<br>　　结论：<br>　　CHD1L促进ICC的发生、发展，并可以作为ICC分子靶向治疗的靶点和影响预后的重要指标。