早期上皮细胞分化相关蛋白在视网膜色素上皮细胞增殖中的功能研究-论文-万方医学网

早期上皮细胞分化相关蛋白在视网膜色素上皮细胞增殖中的功能研究

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摘要目的：成熟RPE细胞在体内处于静止状态且与神经视网膜的结构和功能密切相关。RPE的增殖稳态受到破坏会引起一系列视网膜病变。本课题组前期工作发现了一种早期上皮细胞分化相关蛋白（EEDA)在体外对RPE细胞的增殖具有明显的抑制作用，但其在体的表达与生理功能尚不清楚。因此，本论文研究旨在探究这种新的功能基因在体内是否具有抑制RPE细胞增殖的功能，并解析其作用机制。<br>　　方法：利用CRISPR/Cas9技术对C57BL/6J小鼠进行基因敲除；通过视网膜下腔注射0.25％透明质酸钠，制造视网膜脱离模型；利用H E染色在体式显微镜下观察Eeda基因敲除小鼠生理状态和视网膜脱离情况下RPE的形态改变；利用RT-PCRd Western blot和免疫荧光染色等技术检测基因敲除小鼠和R P E细胞增殖相关基因表达水平的变化。<br>　　结果：Eeda基因敲除小鼠在胚胎11.5天 RPE细胞Ki67阳性率较高。成年期Eeda基因敲除小鼠出现了多层排列的RPE结构。Eeda基因敲除小鼠在视网膜脱离状态下更容易被激活而进入增殖状态。对于作用机制的研究，我们发现在过表达 EEDA的RPE细胞中，CDKN1A的表达上调，同时CDKN1A下游的细胞周期相关基因p107、E2F1和 p-RB表达下调。而在过表达EEDA的RPE细胞中干扰 CDKN1A可以部分挽救RPE细胞的增殖。<br>　　结论：EEDA作为一种新的细胞增殖抑制基因，可以在体内抑制RPE细胞的增殖。CDKN1A部分介导EEDA对 RPE的增殖调控。 EEDA的表达缺失会引起RPE细胞的异常增殖并导致多层RPE的结构，提示EEDA可能与一些视网膜疾病如PVR等有关。