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摘要目的：<br>　　⑴探究骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植后是否能够改善脓毒症小鼠生存情况。⑵探究BMSCs移植后是否能够改善脓毒症小鼠相关脏器的损伤，同时检测相关炎症及凝血指标，观察BMSCs能否缓解脓毒症小鼠炎症反应及凝血紊乱情况。⑶通过体外细胞实验，构建人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与BMSCs、小鼠巨噬细胞与BMSCs共培养模型，研究BMSCs能否缓解脂多糖（LPS）造成的内皮细胞及巨噬细胞损伤，并探究BMSCs可能参与到的调节通路和机制。<br>　　方法：<br>　　①将8-12周雄性C57BL/6小鼠随机分为三组：假手术组（Sham组）、脓毒症模型组（CLP组）、BMSCs治疗组（CLP+BMSCs组）。应用盲肠结扎穿孔术（CLP）制造脓毒症模型，造模6小时后，经尾静脉注射给予CLP+BMSCs组小鼠含1*106/0.3ml的BMSCs悬液，CLP组小鼠经尾静脉给予0.3ml生理盐水，每12小时观察一次各组小鼠的生存情况，截止至96小时并作生存曲线。②造模24小时后，测定各组断尾出血时间；小鼠经麻醉眼球取血并留取所需脏器样品。所取血液样品通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测相关指标的变化，同时做蛋白芯片检测血管生成相关指标变化情况；留取的肺脏、肝脏做组织切片；应用免疫印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测肝、肺组织相关炎症及凝血指标的蛋白和基因表达情况。③将HUVEC分为四组：空白组（HUVEC+PBS组）、LPS刺激组（HUVEC+LPS组）、BMSCs对照组(HUVEC+PBS+BMSCs)、BMSCs治疗组（HUVEC+LPS+BMSCs组）。LPS模型组给予1μg/ml的LPS，BMSCs治疗组在给予1μg/ml的LPS的基础上在Transwell中放入等数的BMSCs，空白组仅给予等量的PBS。6小时后，观察HUVEC迁移和通透性情况；提取共培养细胞培养上清、HUVEC蛋白质分别应用酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印迹技术观察其相关炎症及凝血指标的变化。④将巨噬细胞分为三组：空白组（巨噬细胞+PBS组）、LPS刺激组（巨噬细胞+LPS组）、BMSCs治疗组（巨噬细胞+LPS+BMSCs组）。LPS模型组给予1μg/ml的LPS，BMSCs治疗组在给予1μg/ml的LPS的基础上在Transwell中放入等数的BMSCs，空白组仅给予等量的PBS。6小时后，通过免疫细胞荧光对巨噬细胞相关指标进行检测；提取巨噬细胞蛋白质及mRNA分别应用蛋白免疫印迹技术和实时荧光定量PCR技术观察其相关指标的变化情况。<br>　　结果：<br>　　⑴对比于Sham组小鼠96小时生存率100％，CLP组仅为15%（P＜0.01），而BMSCs移植治疗后脓毒症小鼠生存率近50%，生存情况明显改善（P＜0.01）。⑵造模24小时后，CLP组较Sham组小鼠断尾出血时间明显缩短（P＜0.01），而BMSCs治疗组较CLP组出血时间有所延长（P＜0.01）。⑶与Sham组相比，CLP组小鼠肺组织严重水肿，可见大量炎性细胞、血细胞浸润，肺泡腔变窄、肺泡结构破坏模糊；而BMSCs治疗组小鼠肺损伤情况明显有所缓解，炎性细胞、血细胞浸润情况有所减轻，肺泡结构有明显改善。CLP组与Sham组相比，肺脏免疫组织化学NE染色阳性表达明显增多，经BMSCs移植后，NE阳性表达显著减少。⑷Sham组肝脏未见明显异常，CLP组小鼠肝细胞明显水肿，有肝索排列紊乱、肝窦挤压变窄等变化，而BMSCs治疗组干细胞水肿有所缓解，肝索排列紊乱及肝窦挤压变窄等情况较CLP组也有所改善；肝脏PAS糖原染色可见，相较于Sham组， CLP组肝脏几乎无糖原染色，而BMSCs治疗后肝脏可见染色。⑸较于Sham组，CLP组小鼠血浆中TNF-α、IL-1β、NE、ALT、AST等指标明显升高（P＜0.01），而在BMSCs治疗后血浆中的上述指标均有所下降且均具有统计学意义（P＜0.01）。⑹血管生成相关蛋白芯片结果表明，较之Sham组， CLP组血浆中CXCL1/CXCL10/CXCL16/MCP-1/CCL3/IL-10等多种细胞因子表达量明显升高，表皮生长因子（EGF）、组织因子（TF）、MMP-3/MMP-8/MMP-9等基质金属蛋白酶表达也有所升高；BMSCs治疗组上诉指标均有所下降。⑺对比Sham组，CLP组小鼠肺脏和肝脏蛋白免疫印迹结果可见蛋白酶活化受体1（PAR1）、TF、NE表达均明显增加，而BMSCs移植后PAR1、TF、NE水平有所下降；CLP组肺脏Cleaved caspase-3、LCⅢB蛋白表达较Sham组也明显增多，经BMSCs治疗后有所改善。⑻各组小鼠肺组织中CXCL1、CXCL10、MCP-1、IL-6、IL-10、细胞间粘附分子-1(ICAM1)、TF、PAR1、MMP-1、Toll样受体4（TLR4），肝脏中TF、ICAM1、TLR4等mRNA表达都有显著统计学差异（P＜0.05）,CLP组水平均明显升高，而BMSCs移植后有所下降。⑼在HUVEC与BMSCs共培养实验中，与空白组相比：LPS刺激组发生迁移的HUVEC数目有所减少（P＜0.01），而BMSCs对照组和BMSCs治疗组中的迁移的HUVEC均明显增多（P＜0.01）；LPS刺激组HUVEC的通透性有所升高（P＜0.05），BMSCs对照组无明显变化，而BMSCs治疗后HUVEC的通透性明显改善（P＜0.01）；LPS刺激组细胞上清中的6-酮-前列腺素F1α(6-k-PGF1α)含量降低（P＜0.05）、血栓烷素B2（TXB2）含量升高（P＜0.05），BMSCs对照组均无明显改变，而BMSCs治疗组6-k-PGF1α含量有所升高、TXB2含量有所下降；LPS刺激组HUVEC的JNK、TF、P65蛋白表达均明显增多，BMSCs对照组无明显变化，而BMSCs治疗组中HUVEC上诉指标蛋白表达均有所下降。⑽在巨噬细胞与BMSCs共培养实验中，与空白组对比：LPS刺激组TF、PAR1、LCⅢB的细胞荧光亮度明显增强，而BMSCs治疗组上诉指标荧光亮度均有所减弱；LPS刺激组TF、LCⅢB蛋白表达明显增多，而BMSCs治疗组表达均减少；LPS刺激组IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、CXCL1、CXCL10、MCP-1、MMP-1、PAR1、TF、ICAM-1、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）等指标的mRNA表达均明显升高（P＜0.05），而BMSCs组上诉指标均明显下降（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　①骨髓间充质干细胞移植能够明显改善脓毒症小鼠的生存率以及炎症反应和凝血紊乱，进而缓解相关脏器的损伤，影响脓毒症小鼠的预后情况；②骨髓间充质干细胞在一定程度上能够通过调节炎症及凝血相关指标改善脂多糖刺激下内皮细胞和巨噬细胞的功能。