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摘要第一部分七种苄基异喹啉类生物碱对大鼠肺成纤维细胞增殖、活化、迁移和凋亡的作用<br>　　目的：研究七种苄基异喹啉类生物碱对大鼠肺成纤维细胞增殖、活化、迁移和凋亡的作用及比较其作用强度。<br>　　方法：气管内灌注博来霉素诱导大鼠肺纤维化（PF），原代培养正常和 PF模型大鼠肺成纤维细胞，TGF-β1（10 ng/mL）分别与五种双苄基异喹啉生物碱（Lien、Nef、Iso、Tet和Dau）和两种单苄基异喹啉类生物碱（Pap和Lot）共同处理两种肺成纤维细胞，采用MTT、Western blot、细胞划痕实验法、Annexin V-FITC/PI双染和流式细胞仪检测药物对细胞增殖、α-SMA蛋白表达、迁移和凋亡的影响。<br>　　结果：<br>　　①TGF-β1（10 ng/mL）可明显诱导正常和PF肺成纤维细胞增殖。五种双苄基异喹啉类生物碱Lien、Nef、Iso、Tet和Dau（0.1~100?mol/L）均可浓度依赖性地显著抑制TGF-β1诱导的正常和PF肺成纤维细胞增殖，且最大抑制增殖效应无明显差异。单苄基异喹啉类生物碱Pap（30、100?mol/L）可显著抑制正常和PF肺成纤维细胞增殖，其最大抑制细胞增殖效应明显低于五种双苄基异喹啉生物碱（Lien、Nef、Iso、Tet和Dau）；Lot（100?mol/L）可显著抑制正常和PF肺成纤维细胞增殖，其最大抑制细胞增殖效应最低。比较IC50，Dau对正常和PF肺成纤维细胞的IC50分别为7.72±0.9934?mol/L和9.346±1.937?mol/L，均低于其他药物。<br>　　②TGF-β1（10 ng/mL）显著促进正常和PF肺成纤维细胞α-SMA蛋白的表达。Lien、 Nef、Iso和Dau（3和30?mol/L）均可浓度依赖性地显著抑制 TGF-β1诱导正常和 PF肺成纤维细胞α-SMA蛋白的升高。Tet（30?mol/L）可显著抑制TGF-β1诱导PF肺成纤维细胞α-SMA蛋白的升高。Pap和Lot不明显影响α-SMA蛋白的表达。相同剂量（3×10-5 mol/L）下，对于正常肺成纤维细胞，与Lien、Nef、Iso、Tet、Pap、Lot相比， Dau抑制α-SMA蛋白表达的作用最强。<br>　　③TGF-β1（10 ng/mL）处理细胞12 h和24 h均能显著促进正常和PF肺成纤维细胞的迁移能力。Lien、Nef、Iso、Tet和Dau（3?mol/L）24 h均能显著抑制TGF-β1诱导正常和PF成纤维细胞迁移能力的增加。Pap和 Lot（3?mol/L）不明显影响细胞迁移能力。<br>　　④TGF-β1（10 ng/mL）处理48 h并不明显影响正常和PF肺成纤维细胞凋亡，Nef、Lien、Iso、Dau、（3?mol/L）处理48 h可显著促进细胞凋亡。Tet、Pap和Lot（3?mol/L）不明显影响细胞凋亡。<br>　　小结：五种双苄基异喹啉类生物碱Lien、Nef、Iso、Tet和Dau可抑制TGF-β1促肺成纤维细胞增殖、活化、迁移作用；Lien、Nef、Iso和Dau促细胞凋亡作用明显；其中Dau抑制增殖效应IC50最小。两种单苄基异喹啉类生物碱Pap和Lot可抑制TGF-β1促肺成纤维细胞增殖，但对细胞活化、迁移和细胞凋亡作用不明显。<br>　　第二部分蝙蝠葛碱对TGF-?1/Smads和ERK1/2通路的作用<br>　　目的：研究蝙蝠葛碱对正常及PF大鼠肺成纤维细胞TGF-β1/Smads和ERK1/2通路蛋白的作用。<br>　　方法：采用原代培养正常和PF模型大鼠肺成纤维细胞，TGF-β1（10 ng/mL）和Dau（0.3，3和30?mol/L）同时作用于肺成纤维细胞48 h后，收集细胞蛋白，Western Blot法检测Smad2/3/4/7和p-ERK1/2以及总ERK1/2蛋白表达量变化。<br>　　结果：<br>　　①作用48 h后，Dau显著降低TGF-β1诱导升高的Smad3/4蛋白表达量。<br>　　②TGF-β1促进p-ERK1/2蛋白的表达，在此基础上，Dau可以显著下调p-ERK1/2的表达，对总ERK1/2没有显著影响。<br>　　小结： Dau显著抑制Smad3/4以及p-ERK1/2蛋白表达增加，可能与其抗肺成纤维细胞作用有关。<br>　　结论：<br>　　（1）Lien、Nef、Iso、Tet和Dau五种双苄基异啉生物碱抑制细胞增殖、活化、迁移以及促进细胞凋亡的作用强于Pap和Lot两种单苄基异喹啉类生物碱。<br>　　（2）从抑制肺成纤维细胞增殖、活化、迁移和促进凋亡方面评价这五种双苄基异喹啉类生物碱对成纤维细胞的作用，发现Dau的作用最显著。<br>　　（3）Dau抗肺成纤维细胞作用机制可能与其抑制TGF-β1/Smad3/4和p-ERK1/2通路蛋白有关。