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摘要目的：<br>　　1.用表达乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的基因片段，即S区“a”抗原决定簇序列替换土拨鼠肝炎病毒（WHV）的相应基因片段，构建WHV-HBV嵌合病毒。<br>　　2.用WHV-HBV嵌合病毒感染土拨鼠，建立表达HBsAg的土拨鼠感染模型。改进及优化土拨鼠感染模型，为乙肝病毒动物模型的研究与发展提供新思路和实验基础。<br>　　方法：<br>　　1.以pBS-WHV1.3质粒为骨架（含有1.3倍过长的WHV基因组），用表达HBsAg的基因片段替换WHV相应基因片段，构建WHV-HBV-Sa嵌合病毒质粒。<br>　　2. WHV-HBV-Sa嵌合病毒质粒转染 Huh7细胞，实时荧光定量 PCR检测细胞内病毒核心DNA水平，ELISA检测细胞培养上清中HBsAg的表达水平，Southern blot检测细胞内嵌合病毒复制中间体水平。<br>　　3. WHV-HBV-Sa嵌合病毒高压尾静脉注射小鼠，实时荧光定量PC R检测血清中嵌合病毒DNA水平，ELISA检测血清HBsAg的表达水平，Southern blot检测肝脏组织中嵌合病毒复制水平，免疫组化法检测肝组织内病毒抗原（WHcAg）的表达。<br>　　4．用含嵌合病毒的小鼠血清感染成年土拨鼠，实时荧光定量PCR及普通PCR检测血清中病毒DNA水平，ELISA检测血清HBsAg和WHcAb的表达。<br>　　结果：<br>　　1．M1，M2是以pBS-WHV1.3质粒为骨架，将HBV基因组的C区启动子区替换WHV基因组相应基因序列后得到的改构质粒（课题组前期工作结果，由刘言提供）。在嵌合质粒M1和M2的基础上，成功构建含HBV S区“a”抗原决定簇基因序列的嵌合病毒质粒Sa-M1、Sa-M2。经基因测序确认序列正确。<br>　　2．质粒pBS-WHV1.3、M1、M2、Sa-M1、Sa-M2转染Huh7细胞。M1、M2、Sa-M1、Sa-M2在细胞培养上清及细胞内的病毒核心DNA水平低于pBS-WHV1.3；Sa-M1、Sa-M2在转染细胞内的病毒核心DN A水平分别低于 M1，M2。Sa-M1、Sa-M2在细胞培养上清中表达HBsAg水平低，无法用ELIS A检测出。<br>　　3．质粒pBS-WHV1.3、M1、M2、Sa-M1、Sa-M2高压尾静脉注射BALB/c小鼠，M1和M2在小鼠体内的复制能力高于pBS-WHV1.3，且病毒可持续复制至注射后第63天；Sa-M1和Sa-M2在小鼠体内的复制能力低于M1，M2和pBS-WHV1.3，但可在小鼠血清中较高水平表达HBsAg。<br>　　4．挑选M2和Sa-M1复制小鼠的血清攻击土拨鼠，建立WHV-HBV嵌合病毒感染的土拨鼠模型。在M2和Sa-M1感染的土拨鼠中，血清中均可检测到WHV DNA。感染M2的土拨鼠血清中WHcAb阳性，感染Sa-M1的土拨鼠血清中HBsAg阳性。<br>　　结论：<br>　　1．成功构建表达HBsAg的WHV-HBV嵌合病毒质粒Sa-M1，Sa-M2。<br>　　2．在高压尾静脉注射的小鼠体内，嵌合病毒Sa-M1，Sa-M2可持续表达HBsAg。但是嵌合病毒的复制能力低于野生型病毒pBS-WHV1.3。<br>　　3．含嵌合病毒的小鼠血清攻击土拨鼠，可造成土拨鼠感染，血清中产生嵌合病毒DNA并表达相应抗原或抗体。