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摘要本文分为以下两个部分进行探讨：<br>　　第一部分 从ER-α/PI3K/Akt信号通路探讨胡芦巴丸活性组分改善HepG2细胞胰岛素抵抗的机理研究<br>　　目的：<br>　　比较胡芦巴丸活性组分薯蓣皂苷元（DSG）、补骨脂素（5-MOP）以及薯蓣皂苷元和补骨脂素（DSG/5-MOP）对人肝癌细胞（HepG2）胰岛素抵抗细胞模型的影响，并探索其相关分子机制。<br>　　方法：<br>　　采用10-6 mol/L胰岛素干预HepG2细胞36h，建立高胰岛素诱导的胰岛素抵抗细胞模型。根据所给予相应的药物干预，分为DSG（10-5 mol/L）组、5-MOP（10-6 mol/L）组、DSG/5-MOP（10-5 mol/L DSG和10-6 mol/L5-MOP）组、雌二醇（β-Estradiol，10-6 mol/L）组，另设模型组和对照组。免疫荧光激光共聚焦观察雌激素受体-α（ERα）的分布与表达；葡萄糖氧化酶法检测上清液葡萄糖消耗；蒽酮法测定细胞内糖原含量；Western Blot检测ERα、src蛋白（src）、磷酸肌醇-3激酶p85亚单位（PI3Kp85）、蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶3-β（GSK-3β）的磷酸化蛋白/总蛋白表达水平，免疫荧光检测葡萄糖转运体-4（GLUT-4）的表达。<br>　　结果：<br>　　免疫荧光激光共聚焦显微镜显示ERα在HepG2细胞的胞膜、胞浆、胞核中均有表达，与对照组比较，模型组细胞内ERα表达降低；与模型组相比，DSG组、5-MOP组、DSG/5-MOP组和β-Estradiol组ERα表达增加。与对照组比较，模型组细胞内糖原合成、细胞上清葡萄糖消耗显著减少（P＜0.01，P＜0.05）；与模型组相比，DSG组、5-MOP组、DSG/5-MOP组和β-Estradiol组细胞内糖原合成、细胞上清葡萄糖消耗显著增加（P＜0.01，P＜0.05），且与DSG组相比，DSG/5-MOP组细胞上清葡萄糖消耗显著减少（P＜0.05）。<br>　　与对照组比较，胰岛素抵抗细胞模型组的细胞内 p-ERα/ER、p-src/src、PI3Kp85/β-actin、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3表达显著降低（P＜0.01，P＜0.05）；与模型组相比，DSG组、5-MOP组、DSG/5-MOP组和β-Estradiol组p-ERα/ER、p-src/src、PI3Kp85/β-actin、 p-Akt/Akt（β-Estradiol组p-Akt/Akt与模型组相比无显著性差异）、p-GSK-3β/GSK-3β表达显著增加（P＜0.01，P＜0.05）；与DSG组相比，DSG/5-MOP组p-src/src表达显著增加（P＜0.01）。与对照组比较，胰岛素抵抗模型组细胞内GLUT-4表达显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，DSG组、5-MOP组、DSG/5-MOP组和β-Estradiol组 GLUT-4表达显著增加（ P＜0.01， P＜0.05）；与5-MOP组相比， DSG/5-MOP组GLUT-4表达显著降低（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　胡芦巴丸中的活性组分DSG和5-MOP可能通过ERα介导的PI3K/Akt信号通路激活而改善胰岛素抵抗。<br>　　第二部分 从AMPK/ACC/CPT-1A信号通路探讨胡芦巴丸活性组分改善LO2细胞脂代谢紊乱的机理研究<br>　　目的：<br>　　比较不同浓度DSG（10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L）对正常人肝细胞（LO2）内脂肪沉积的影响，并探索其相关分子机制。<br>　　方法：<br>　　用含0.25mmol/L棕榈酸（PA）的DMEM高糖完全培养基干预LO2细胞24h，建立高糖高脂诱导的非酒精性脂肪肝的细胞模型；根据所给予相应的药物干预，分为低剂量DSG组（10-7 mol/L）、中剂量DSG组（10-6 mol/L）、高剂量DSG组（10-5 mol/L）、A-769662组（AMPK激活剂，10-5 mol/L），另设模型组和对照组。荧光测定细胞内活性氧（ROS）含量、线粒体膜电位（MMP）、培养液中葡萄糖消耗；酶法检测细胞内甘油三酯（TG）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）含量，细胞上清液谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰基转移酶（γ-GT）含量；Western Blot检测细胞内腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的磷酸化蛋白/总蛋白表达水平，细胞内脂肪酸合成酶（FAS）、肉毒碱棕榈酰转移酶-1A（CPT-1A）、固醇调控元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）的蛋白表达水平，胞浆细胞色素c（cyc）含量。此外，用AMPK抑制剂Compound C（10-5mol/L）预刺激细胞5h后再给予相应的药物干预，Western Blot检测AMPK, ACC的磷酸化蛋白/总蛋白表达水平。<br>　　结果：<br>　　与对照组相比，ROS在非酒精性脂肪肝细胞模型组细胞内含量升高；与模型组相比，低剂量DSG组、中剂量DSG组、高剂量DSG组、A-769662组ROS含量降低。与对照组相比，非酒精性脂肪肝细胞模型组细胞MMP显著降低（P＜0.01）、细胞上清葡萄糖消耗显著减少（P＜0.01）；与模型组相比，低剂量DSG组、中剂量DSG组、高剂量DSG组、A-769662组细胞MMP显著升高（P＜0.01）、细胞上清葡萄糖消耗显著升高（P＜0.01，P＜0.05）。与对照组相比，TG、ALT、AST、γ-GT在非酒精性脂肪肝细胞模型组细胞中显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，低剂量 DSG组、中剂量DSG组、高剂量DSG组、A-769662组细胞TG、ALT、AST、γ-GT显著降低（P＜0.01，P＜0.05）。与对照组相比，GSH-PX、SOD、CAT含量在模型组细胞内显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，低剂量DSG组、中剂量DSG组、高剂量DSG组、A-769662组细胞内GSH-PX、SOD、CAT含量显著升高（P＜0.01）。与对照组相比，模型组细胞内MDA含量显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，低剂量DSG组、中剂量DSG组、高剂量DSG组、A-769662组细胞内MDA含量显著降低（P＜0.01）。<br>　　与对照组相比，p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC、CPT-1A/β-actin表达量在非酒精性脂肪肝细胞模型组细胞内显著降低（P＜0.01，P＜0.05）；与模型组相比，低剂量DSG组（CPT-1A/β-actin无显著性）、中剂量DSG组、高剂量DSG组、A-769662组细胞内p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC、CPT-1A/β-actin表达量显著升高（P＜0.01，P＜0.05）。与对照组相比，细胞内 FAS/β-actin、SREBP-1c/β-actin表达量和胞浆中cyc/β-actin含量在非酒精性脂肪肝细胞模型组显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，低剂量DSG组、中剂量DSG组、高剂量DSG组、A-769662组细胞内FAS/β-actin、SREBP-1c/β-actin表达量和胞浆中cyc/β-actin含量显著降低（P＜0.01，P＜0.05）。与DSG组（10-5 mol/L）细胞相比，Compound C/DSG组（10-5mol/L Compound C+10-5mol/L DSG）细胞p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC表达量显著降低（P＜0.01）。<br>　　结论：<br>　　胡芦巴丸中的活性组分DSG可以改善高糖高脂诱导的LO2细胞内脂质沉积。其机制可能与激活AMPK/ACC/CPT-1A信号通路、增加脂质分解、减少脂质合成、改善氧化应激损伤有关。