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摘要动脉粥样斑块内的新生毛细血管是增加斑块不稳定性、引起斑块血肿甚至破裂的重要因素。氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）是动脉粥样硬化明确的致病因子。研究表明ox-LDL可直接促进内皮细胞的血管新生及细胞衰老，但不同浓度ox-LDL对内皮细胞成管和衰老的具体作用规律、机制及其中有效的调控靶点均尚未阐明。<br>　　目的：观察不同浓度ox-LDL对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）体外成管、细胞衰老、细胞增殖及生长停滞特异性蛋白6（growth arrest-specific gene6,Gas6）表达的影响。通过干预HUVECs中Gas6蛋白水平，探讨Gas6对ox-LDL诱导下HUVECs成管及衰老的调控作用及相应机制。<br>　　方法：第一部分①体外培养HUVECs细胞株，予以不同浓度ox-LDL（0、10、20、40、80及160μg/ml）培养24h，利用Matrigel基质胶体外成管实验及MTT细胞活力测定实验检测HUVECs体外成管及细胞活力的效果；②在上述ox-LDL刺激条件下，通过β-半乳糖苷酶染色及EdU-DNA标记的细胞增殖实验，检测不同浓度ox-LDL对HUVECs细胞衰老及增殖作用的影响；③通过前两部分实验得到的ox-LDL诱导HUVECs体外成管及衰老的最适作用浓度，检测该最适作用浓度下ox-LDL对细胞中Gas6水平的影响。第二部分①利用慢病毒构建低表达Gas6工具（Gas6-shRNA）感染HUVECs，结合人重组Gas6蛋白（rhGas6），以达到干预HUVECs中Gas6蛋白水平的目的，分组如下：阴性对照病毒组、Gas6-shRNA组、rhGas60ng/ml组、rhGas625ng/ml组、rhGas650ng/ml组及rhGas6100ng/ml组；②按照上述分组，探讨干预Gas6对ox-LDL诱导下HUVECs体外成管及细胞衰老效应的调控作用。第三部分①根据第二部分筛选出rhGas6的最适作用浓度，结合Gas6-shRNA感染工具，利用Western blotting检测Akt、Src、p70S6K与Erk蛋白及蛋白磷酸化的影响，寻找Gas6调控ox-LDL诱导下HUVECs所激活的信号蛋白；②根据上一步筛选出的信号通路，利用相应信号通路成熟有效的抑制剂，进一步探究Gas6对ox-LDL诱导下HUVECs体外成管及细胞衰老的调控机制。<br>　　结果：第一部分ox-LDL对HUVECs的体外成管呈现双向性，即低浓度ox-LDL（40μg/ml）促进细胞的成管效应，而高浓度（160μg/ml）则抑制细胞的体外成管，该作用与ox-LDL对内皮细胞活力的影响没有显著联系；β-半乳糖苷酶染色及细胞增殖实验提示高浓度ox-LDL刺激下HUVECs染色阳性细胞所占比率较对照组显著增加（P<0.05）、增殖能力较对照组显著减弱（P<0.05）；Western blotting检测细胞中Gas6发现，与对照组相比，低浓度ox-LDL处理后细胞中Gas6水平升高（P<0.01），而高浓度ox-LDL则使Gas6水平降低（P<0.01）。第二部分利用慢病毒构建Gas6低表达工具感染HUVECs后，细胞内Gas6水平显著下降（与阴性对照病毒组相比P<0.01），体外成管实验显示在低浓度ox-LDL刺激下Gas6-shRNA组交叉连接数目下降（与阴性对照病毒组相比P<0.01）、小管长度也显著缩短（与阴性对照病毒组相比P<0.01），提示Gas6-shRNA组成管效应减弱；β-半乳糖苷酶染色实验提示Gas6-shRNA组细胞染色阳性率较阴性对照病毒组更高（P<0.05）；外源性给予HUVECs不同浓度的rhGas6处理后，发现rhGas6对高浓度ox-LDL刺激下体外成管反应有促进的趋势，当rhGas6的浓度达到100ng/ml时交叉连接数目显著高于未加入rhGas6组（P<0.01），形成小管长度也明显增加（P<0.01），提示在100ng/ml rhGas6的作用下细胞体外成管效应显著提升，β-半乳糖苷酶染色实验显示细胞染色阳性率随着rhGas6浓度的升高而下降，当rhGas6浓度达到100ng/ml时升高具有统计学意义。第三部分Western blotting实验显示，在相应ox-LDL浓度刺激下，Gas6-shRNA组p-Akt及p-p70S6K的水平下调而100ng/ml rhGas6组中两者的水平则显著上调，与相应对照组相比均具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）；将100ng/ml rhGas6组细胞予以PI3K-Akt-p70S6K信号通路的抑制剂LY294002与Rapamycin预处理后，p-Akt及p-p70S6K被显著下调，100ng/ml rhGas6组细胞体外成管效应的指标出现下降，降低β-半乳糖苷酶阳性细胞染色率的作用也被显著抑制，其差异均具有统计学意义。<br>　　结论：ox-LDL对HUVECs的体外成管呈现双向性，即：低浓度ox-LDL促进细胞的成管效应，而高浓度则抑制细胞的体外成管，其抑制作用与细胞衰老密切相关。Gas6可通过PI3K-Akt-p70S6K通路逆转ox-LDL诱导下的HUVECs体外成管及细胞衰老效应，提示Gas6可成为控制动脉粥样斑块中血管新生反应极具潜力的作用靶点，为稳定动脉斑块、减少不良心脑血管事件的发生提供新思路。