摘要背景:<br> 甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤之一,部分患者在治疗过程中出现核素治疗抵抗,而分子靶向治疗又存在毒副作用大及肿瘤耐药等问题。目前研究证实HSP90抑制剂17-AAG与mTOR抑制剂Torin2均可抑制未分化甲状腺癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)增殖及诱导凋亡。介孔二氧化硅纳米载体(mesoporous silica nanoparticles,MSNs)可有效实现多种药物的助溶、共载及肿瘤靶向性治疗。<br> 目的:<br> 构建一种新型标记放射性核素且共载两种药物、表面修饰抗血管内皮生长因子受体2抗体(Anti-vascular endothelial growth factor recepter2 antibody, Anti-VEGFR2 ab)的靶向三合一纳米载体,并探讨该核素纳米药物载体对未分化甲状腺癌细胞的体外作用。<br> 方法:<br> 本研究首先进行了(17-AAG+Torin2)@MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA-131I)三合一纳米载体的构建,包括采用传统的氯氨T法对纳米载体进行了核素标记,并计算了标记率、放化纯。对成功构建完整的纳米载体结构、粒径、载药量、靶向性、释药动力学等方面进行了研究。在体外水平采用MTS实验明确两种分子靶向药物联合用药是否可产生协同抗肿瘤作用,并根据中效原理计算药物联合作用指数(combination index,CI)。通过流式细胞仪及共聚焦显微镜观察ATC细胞对载体的细胞吞噬作用以进一步验证标记Anti-VEGFR2 ab对纳米载体胞内摄取量的影响。采用核素胞内摄取定量实验观察了标记有放射性核素131I且具有靶向作用的纳米载体的胞内停留时间,评估该核素纳米载体的细胞内存留效果。此外,还从细胞水平经MTS实验验证共载核素及药物的纳米载体对肿瘤细胞的杀伤作用。<br> 结果:<br> (1)成功制备了包载药物并修饰Anti-VEGFR2 ab的纳米载体,并完成了131I的核素表面标记,其标记率为66-78%,放化纯可高达98.8-99.4%。体外药物释放实验显示纳米载体包裹的17-AAG和Torin2、纯17-AAG和纯 Torin2在180min时的最大释放率分别为大约15%、50%、40%和20%。<br> (2)体外实验方面,17-AAG与Torin2单独及联合应用均可明显抑制肿瘤细胞生长,在17-AAG与Torin2浓度比为1:1时,两药总药物浓度大于0.52μM时,CI<1,17-AAG和Torin2对FRO细胞呈现出协同的作用。<br> (3)荧光共聚焦显微镜与流式细胞仪实验均证实了(17-AAG+Torin2)@MSNs-BSA与(17-AAG+Torin2)@MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA)两种纳米载体可以被FRO细胞快速且高效的摄取,其中细胞对具有靶向性的纳米载体的摄取能力高于未进行靶向性标记的纳米载体。核素胞内摄取定量实验显示标记有放射性核素131I的纳米载体可有效作用于FRO细胞并能被该细胞快速摄取,在加入核素纳米载体后3h达到摄取高峰,细胞对(17-AAG+Torin2)@MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA-131I)的摄取量明显高于Na131I组(P<0.001)。<br> (4)MTS实验证明了核素纳米药物载体的有效细胞杀伤作用,对于细胞抑制率,(17-AAG+Torin2)@MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA)高于纯药物组(17-AAG+Torin2),(t=0.55-5.75, P<0.05)(药物浓度为5μM时除外);(17-AAG+Torin2)@MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA-131I)高于(17-AAG+Torin2)@MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA),(t=0.33-6.64,P<0.05)(药物浓度为2μM、5μM时除外)。MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA-131I)高于Na131I(t=3.93-26.08, P<0.01);(17-AAG+Torin2)@MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA-131I)明显高于MSNs-(Anti-VEGFR2 ab+BSA-131I)(P<0.001)。<br> 结论:<br> 甲状腺未分化癌FRO细胞系能够高效摄取此三合一新型纳米载体,且标记Anti-VEGFR2 ab的靶向性纳米载体具有更强的与FRO肿瘤细胞结合并被其摄取的能力。131I标记的核素纳米药物载体可较快且平稳的存留在甲状腺未分化癌肿瘤细胞中并表现出明显的杀伤肿瘤细胞效果,可有效抑制肿瘤细胞的生长。
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