摘要目的:<br> 研究 N2a细胞经氧糖剥夺再灌注后的细胞凋亡情况以及RasGRP1蛋白表达的变化,同时探究RasGRP1对N2a细胞氧糖剥夺再灌注处理后的ERK信号通路的影响。旨在探讨RasGRP1在氧糖剥夺再灌注损伤中的作用及其可能机制。<br> 方法:<br> 选取小鼠神经母细胞瘤 N2a细胞作为研究对象,随机分为5组,分别予以无氧糖剥夺处理,以及氧糖剥夺4小时再灌注不同时间。各组细胞在光学显微镜下观察并拍照,用流式细胞计数检测各组细胞凋亡率的变化,用Real-time PCR检测RasGRP1 mRNA表达变化,用 Western blot检测 RasGRP1蛋白表达变化。用 siRNA使RasGRP1表达沉默,用流式细胞计数检测各组细胞凋亡率,以及在氧糖剥夺4小时再灌注12小时及24小时情况下,用Western blot检测各组ERK1/2,p-ERK1/2蛋白表达情况。<br> 结果:<br> 1.氧糖剥夺再灌注细胞凋亡率的变化:氧糖剥夺再灌注时间延长,细胞的凋亡率也随着增加。OGD组细胞的凋亡率较正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)。OGD/R4h组细胞的凋亡率较正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),随着再灌注时间的延长,再灌注12小时组和24小时组细胞的凋亡率明显升高,同正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。<br> 2.RasGRP1 mRNA的表达变化:随着氧糖剥夺再灌注时间的延长,RasGRP1 mRNA的表达逐渐升高。氧糖剥夺再灌注0h组N2a细胞的RasGRP1 mRNA较正常对照组比差异无统计学意义(P>0.05)。氧糖剥夺再灌注4小时后,N2a细胞的RasGRP1 mRNA表达较正常对照组相比稍增加(P<0.05),随着再灌注时间的延长,再灌注12小时组和24小时组N2a细胞的RasGRP1 mRNA的表达明显增加,较正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。<br> 3.RasGRP1表达沉默组与空白载体组与正常细胞组比,氧糖剥夺再灌注12小时以及24小时的细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。<br> 4.RasGRP1表达沉默组较空白载体组与正常细胞组的ERK1表达无明显变化,ERK2表达降低,p-ERK1/2均明显下降(P<0.05)。<br> 结论:<br> 1.氧糖剥夺再灌注后,随着氧糖剥夺再灌注时间的变化, N2a细胞细胞凋亡率增高,RasGRP1的表达也随着增加。<br> 2. RasGRP1可以抑制氧糖剥夺再灌注后神经细胞的凋亡,与激活ERK信号通路有关。
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