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Elp3在60Coγ射线诱导的肝癌细胞DNA损伤修复中的作用

摘要目的:在肝癌细胞Hep3B内,研究Elp3在60Coγ射线辐照引起的DNA损伤修复中的功能及其分子机制;对比研究肝正常细胞7701内Elp3是否有类似的作用和机制。<br>  方法:<br>  1.构建携带Elp3的慢病毒载体。<br>  2.用慢病毒来建立稳定过表达/干扰Elp3的细胞系。<br>  3.以OTM为指标,用彗星电泳检测辐照后细胞内DNA的损伤程度。<br>  4.流式细胞仪检测辐照后细胞的凋亡率。<br>  5.实时荧光定量PCR检测细胞中Mre11、ATM、DNA-PKcs损伤修复相关基因的mRNA表达量。<br>  6.Western blot检测各组细胞中DNA-PKcs、Mre11、AKT、p-AKT、ATM、p-ATM损伤修复相关蛋白的表达量。<br>  结果:<br>  1.用PCR、测序鉴定后,初步确定携带Elp3的慢病毒载体构建成功。<br>  2.荧光定量PCR、Western blot检测后显示,稳定过表达/干扰Elp3的细胞系建立成功。<br>  3.彗星电泳检测结果显示,在肝癌细胞Hep3B内,Elp3能够减轻辐照引起的肝癌细胞内DNA损伤程度,但是在肝正常细胞7701内,Elp3对辐照引起的DNA损伤程度无影响。<br>  4.流式细胞仪检测辐照后细胞凋亡率,结果表明,在肝癌细胞Hep3B内,与对照组相比较,Elp3过表达组的细胞凋亡率明显减少,而Elp3干扰组的凋亡率明显增加,但是在肝正常细胞7701内,各组细胞的凋亡率无明显变化。<br>  5.实时荧光定量PCR检测结果表明,在肝癌细胞Hep3B内,Elp3可以促进DNA损伤修复因子DNA-PKcs、Mre11的mRNA水平表达,但对ATM的mRNA水平表达无影响。在肝正常细胞7701内,Elp3对DNA损伤修复因子DNA-PKcs、Mre11、ATM的mRNA表达量均无影响。<br>  6.Western Blot检测结果表明,在肝癌细胞Hep3B内,Elp3可以促进DNA损伤修复因子DNA-PKcs、p-AKT、Mre11、p-ATM蛋白水平的表达。在肝正常细胞7701内,Elp3对DNA损伤修复因子DNA-PKcs、p-AKT、Mre11、p-ATM的蛋白水平表达均无影响。<br>  结论:<br>  1.经60Coγ射线辐照后,Elp3能够降低肝癌细胞Hep3B内DNA损伤程度,并降低细胞凋亡率,表明Elp3对辐照引起Hep3B细胞内的DNA损伤具有一定的修复作用。<br>  2.Elp3可能是通过DNA-PKcs、AKT、Mre11、ATM等DNA损伤修复相关因子来促进肝癌细胞内的DNA损伤修复。<br>  3.经60Coγ射线辐照后,Elp3对肝正常细胞7701的DNA损伤修复无影响,并且在肝正常细胞7701内,Elp3对DNA损伤修复因子DNA-PKcs、p-AKT、Mre11、p-ATM的表达无影响。

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