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摘要目的：建立稳定过表达Elp3及稳定干扰Elp3表达的肝癌细胞株，通过观察不同细胞株在顺铂诱导后的细胞凋亡率差异，并与正常肝细胞进行对比，从而探究顺铂诱导下Elp3对细胞凋亡的影响以及其分子机制。<br>　　方法：<br>　　1.转染PCDH-Elp3病毒载体后的HepG2细胞经Puror筛选得到Elp3过表达稳定细胞株；转染GV248-shElp3毒载体后的HepG2细胞经Puror筛选得到Elp3稳定干扰细胞株。<br>　　2.通过Western blot和Real-time PCR鉴定稳定过表达Elp3及稳定干扰Elp3表达的HepG2细胞株中Elp3的表达水平。<br>　　3.流式细胞术检测不同剂量的顺铂处理后，HepG2细胞以及7701细胞凋亡水平的变化。<br>　　4.流式细胞术检测顺铂处理Elp3过表达及干扰的HepG2细胞组后，细胞凋亡的差异；并检测顺铂处理Elp3过表达及干扰的7701细胞组后，细胞凋亡的差异。<br>　　5.Western blot检测顺铂处理与未处理的Elp3过表达及干扰的HepG2细胞组中caspase3、cleaved caspase3、AKT、p-AKT、BAD、p-BAD和内参蛋白的蛋白表达水平。<br>　　6.Western blot检测瞬时转染不同剂量Elp3过表达质粒PIRES2-EGFP-Elp3o、Elp3干扰质粒GV248-Elp3i的HepG2细胞组中caspase3、cleaved caspase3、AKT、p-AKT、BAD、p-BAD和内参蛋白的蛋白表达水平。<br>　　7.Western blot检测顺铂处理与未处理的Elp3过表达及干扰的7701细胞组中AKT、p-AKT、BAD、p-BAD和内参蛋白的蛋白表达水平。<br>　　8.在HepG2细胞中瞬时转染四种Elp3蛋白的序列敲除质粒以及Elp3过表达和干扰质粒，流式细胞术检测以上几组细胞在顺铂处理后的凋亡变化。<br>　　结果：<br>　　1.在293T细胞中包装好PCDH-Elp3及GV248-shElp3病毒后，感染HepG2细胞并用500ng/μl的Puror药物筛选浓度进行筛选，7天后用荧光显微镜观察其绿色荧光蛋白的表达情况，进一步筛选得到稳定过表达和稳定干扰Elp3的HepG2细胞株。<br>　　2. Western blot、Real-time PCR鉴定筛选得到的稳定过表达Elp3及稳定干扰Elp3表达的HepG2细胞株，鉴定结果表示目的基因已经正确表达，细胞株成功建立。<br>　　3.流式细胞术检测发现，与正常肝细胞株7701细胞相比，肝癌细胞株HepG2细胞对顺铂引起的凋亡有一定的抵抗作用。<br>　　4.流式细胞术证明，在HepG2细胞中，过表达Elp3会增加细胞对顺铂诱导的凋亡的抵抗作用，抑制细胞凋亡产生，而干扰Elp3使细胞降低这种抵抗作用，促进了凋亡的产生；同时在7701细胞中，Elp3过表达或干扰并不会对细胞凋亡产生影响。<br>　　5.Western blot检测顺铂处理与未处理时各稳定感染HepG2细胞株的caspase3、cleaved caspase3、AKT、p-AKT、BAD、p-BAD蛋白表达发现：顺铂处理后的HepG2细胞中，Elp3过表达能抑制caspase3的裂解，增加p-AKT和p-BAD的蛋白表达水平，而干扰Elp3则促进了caspase3的裂解，抑制p-AKT和p-BAD的蛋白表达水平。<br>　　6.Western blot检测瞬时转染不同剂量Elp3过表达质粒PIRES2-EGFP-Elp3o、Elp3干扰质粒GV248-Elp3i的HepG2细胞株中以上蛋白的表达水平，得出Elp3的表达量与caspase3的裂解、AKT磷酸化水平以及BAD磷酸化水平之间存在剂量效应。<br>　　7.Western blot检测顺铂处理与未处理时各稳定感染7701细胞株的AKT、p-AKT、BAD、p-BAD蛋白表达发现：顺铂处理后的7701细胞中，过表达以及干扰Elp3不会引起AKT磷酸化水平以及BAD磷酸化水平的变化。<br>　　8.流式细胞术检测发现，HepG2细胞中瞬时转染Elp3蛋白的序列敲除质粒会对顺铂诱导的细胞凋亡产生影响，相比于对照组，过表达Elp3-d3蛋白与过表达Elp3o蛋白均引起对凋亡的抑制，过表达Elp3-d1蛋白与干扰Elp3蛋白时均引起对凋亡的促进，过表达Elp3-d2、Elp3-d4蛋白的细胞与对照组无显著差异。<br>　　结论：<br>　　1.成功建立慢病毒感染的Elp3过表达与干扰Elp3表达的HepG2稳定细胞株，正确表达出目的蛋白。<br>　　2.与正常肝细胞株7701细胞相比，肝癌细胞株HepG2细胞会抑制顺铂引起的凋亡。在HepG2细胞中，过表达Elp3会增强这种抵抗作用，干扰Elp3表达则使细胞对顺铂更加敏感；但在7701细胞株中，Elp3的过表达和干扰并未引起细胞凋亡的变化。<br>　　3.在HepG2细胞中，Elp3过表达会激活AKT信号通路，促进AKT的磷酸化，并且促进BAD的磷酸化；而干扰Elp3表达则会抑制AKT的磷酸化和BAD的磷酸化水平；但在7701细胞中，Elp3并不会引起AKT信号通路和BAD磷酸化的变化。<br>　　4.肝癌细胞中，Elp3蛋白抑制顺铂引起的细胞凋亡的生物学功能依赖于其HAT活性。