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摘要第一部分采用全自动标准化方法检测正常人血浆VWF水平及其影响因素分析<br>　　目的：采用全自动标准化方法检测正常人血管性血友病因子（VWF）各指标并分析其影响因素。<br>　　方法：采用全自动、标准化检测仪及配套试剂测定70名正常人VWF抗原（VWF∶Ag）、VWF瑞斯托霉素辅因子活性（VWF∶Rco）、VWF胶原结合试验（VWF∶CB）、凝血因子Ⅷ活性（FⅧ∶C），比较年龄、ABO血型、性别及地域因素对正常人VWF各指标的影响。对英国国家生物标准与检定所（NIBSC）确认的8个标准血浆样本（2名正常人、6例2型VWD）进行VWF各项指标检测。<br>　　结果：①70名正常人血浆VWF∶Ag为（95.4±44.9）%，VWF∶Rco为（105.9±35.4）%， VWF∶CB为（89.8±28.4）%；VWF∶Rco/VWF∶Ag比值为1.18±0.25， VWF∶CB/VWF∶Ag比值为1.03±0.29。②年龄≥30岁组与<30岁组比较，血浆VWF各指标差异均无统计学意义（P>0.05）；③O型血组VWF∶Rco、VWF∶CB低于非O型血组（t=2.074，P=0.042；t=3.949，P=0.001），VWF∶Ag、VWF∶Rco/VWF∶Ag、VWF∶CB/VWF∶Ag比值差异无统计学意义（P>0.05）；④男、女性组 VWF各指标差异无统计学意义（P>0.05）；⑤北方（淮河以北地区）组VWF∶Ag、VWF∶CB高于南方（苏州地区）组（t=4.525，P=0.001；t=3.214，P=0.002），VWF∶Rco/VWF∶Ag、VWF∶CB/VWF∶Ag比值低于南方组（ t=6.373， P=0.001；t=2.902， P=0.005）， VWF∶Rco差异无统计学意义（t=1.598，P=0.115）。⑥8个标准血浆样本各项VWF指标检测结果符合已知诊断。<br>　　结论：通过使用全自动标准化检测设备首次获得较完整的正常人血浆VWF水平检测数据；ABO血型和地域因素对VWF水平有显著影响，而年龄和性别的影响不显著。<br>　　第二部分73例血管性血友病的临床分析<br>　　目的：采用全自动标准化方法检测血管性血友病（VWD）患者血浆血管性血友病因子（VWF）各指标，同时回顾性分析患者的临床资料，旨在进一步提高我国对VWD患者的临床与试验诊断效率，促进VWD的规范化诊治。<br>　　方法：采用全自动标准化VWF抗原和活性检测方法对我院诊治的73例VWD患者的VWF抗原（VWF∶Ag）、VWF瑞斯托霉素辅因子活性（VWF∶Rco）、VWF胶原结合试验（VWF∶CB）、凝血因子 FⅧ活性（FⅧ∶C）进行检测，并采用 VWF多聚体分析方法进行分型诊断试验，同时回顾性分析患者的临床出血表现和治疗转归情况。<br>　　结果：73例VWD患者中，男性27例，女性46例，男性中位年龄8（1～40）岁，女性中位年龄25（1～65）岁。1型28例（38.4%），2型20例（27.4%，包括2A型14例、2B型2例、2M型3例、2N型1例），3型25例（34.2%）。出血表现多以皮肤瘀斑（65.8%）、鼻出血（61.6%）、牙龈出血（46.1%）、术后或外伤后出血难止（15.1%）为主，女性患者中，27例患者出现月经量增多（58.7%）。按照 ISTH-BAT问卷表统计出血积分，43例患者被认为存在异常出血（57.5%）。35例患者进行了替代治疗，4例月经量多的女性患者在替代治疗的基础上联合性激素止血，1例因出血难以控制行子宫切除术。<br>　　结论： VWD患者的临床出血表现具有较大异质性，通过自动化检测手段可以提高VWD的临床与试验诊断效率，必要的诊断与分型诊断试验可以对其进行精确的分类，以便予以个体化的治疗。<br>　　第三部分22例血管性血友病的基因检测及发病机制研究<br>　　目的：采用一代测序（Sanger）和二代测序（NGS）对血管性血友病（VWD）患者进行血管性血友病因子（VWF）基因筛查，比较两种测序方法在VWD基因检测中的优劣性。同时研究其基因型与表型之间的关系，以便进一步探讨 VWD的分子发病机制。<br>　　方法：本研究收集了22例VWD患者的外周血标本以及临床和实验室检查资料，所有患者均进行了NGS检测（包含目前已知的与出凝血疾病相关的89种基因），其中11例患者同时采用 Sanger法对 VWF基因进行了测序。<br>　　结果：22例患者中，1型VWD4例，2A型VWD1例，2B型VWD2例，2M型VWD3例，3型VWD12例。22例VWD患者中共发现25种VWF基因突变，其中8种为未见报道的新的基因突变。1型和2型VWD患者以杂合突变为主，3型患者主要表现为复合杂合突变。NGS在10例VWD患者中发现了14种VWF基因突变，检出率为91%；Sanger法在7例患者中发现5种VWF基因突变，检出率为64%。除VWF基因外，NGS在10例患者中共检测到与出凝血疾病相关的14种基因的16种突变。<br>　　结论：通过对22例VWD患者进行基因筛查，共发现了8种新的VWF基因突变，扩充了我国VWF基因突变数据库。VWF基因突变的检测有助于VWD的诊断与鉴别诊断，有助于更好地理解VWF分子遗传学和相关表型的关系。最后，NGS提供了一个有效的用于分析单个大基因的实验室检测手段，其便捷性、准确性较前大幅提高，对于VWD基因诊断策略的改进具有重要意义。