摘要第一部分采用全自动标准化方法检测正常人血浆VWF水平及其影响因素分析<br> 目的:采用全自动标准化方法检测正常人血管性血友病因子(VWF)各指标并分析其影响因素。<br> 方法:采用全自动、标准化检测仪及配套试剂测定70名正常人VWF抗原(VWF∶Ag)、VWF瑞斯托霉素辅因子活性(VWF∶Rco)、VWF胶原结合试验(VWF∶CB)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ∶C),比较年龄、ABO血型、性别及地域因素对正常人VWF各指标的影响。对英国国家生物标准与检定所(NIBSC)确认的8个标准血浆样本(2名正常人、6例2型VWD)进行VWF各项指标检测。<br> 结果:①70名正常人血浆VWF∶Ag为(95.4±44.9)%,VWF∶Rco为(105.9±35.4)%, VWF∶CB为(89.8±28.4)%;VWF∶Rco/VWF∶Ag比值为1.18±0.25, VWF∶CB/VWF∶Ag比值为1.03±0.29。②年龄≥30岁组与<30岁组比较,血浆VWF各指标差异均无统计学意义(P>0.05);③O型血组VWF∶Rco、VWF∶CB低于非O型血组(t=2.074,P=0.042;t=3.949,P=0.001),VWF∶Ag、VWF∶Rco/VWF∶Ag、VWF∶CB/VWF∶Ag比值差异无统计学意义(P>0.05);④男、女性组 VWF各指标差异无统计学意义(P>0.05);⑤北方(淮河以北地区)组VWF∶Ag、VWF∶CB高于南方(苏州地区)组(t=4.525,P=0.001;t=3.214,P=0.002),VWF∶Rco/VWF∶Ag、VWF∶CB/VWF∶Ag比值低于南方组( t=6.373, P=0.001;t=2.902, P=0.005), VWF∶Rco差异无统计学意义(t=1.598,P=0.115)。⑥8个标准血浆样本各项VWF指标检测结果符合已知诊断。<br> 结论:通过使用全自动标准化检测设备首次获得较完整的正常人血浆VWF水平检测数据;ABO血型和地域因素对VWF水平有显著影响,而年龄和性别的影响不显著。<br> 第二部分73例血管性血友病的临床分析<br> 目的:采用全自动标准化方法检测血管性血友病(VWD)患者血浆血管性血友病因子(VWF)各指标,同时回顾性分析患者的临床资料,旨在进一步提高我国对VWD患者的临床与试验诊断效率,促进VWD的规范化诊治。<br> 方法:采用全自动标准化VWF抗原和活性检测方法对我院诊治的73例VWD患者的VWF抗原(VWF∶Ag)、VWF瑞斯托霉素辅因子活性(VWF∶Rco)、VWF胶原结合试验(VWF∶CB)、凝血因子 FⅧ活性(FⅧ∶C)进行检测,并采用 VWF多聚体分析方法进行分型诊断试验,同时回顾性分析患者的临床出血表现和治疗转归情况。<br> 结果:73例VWD患者中,男性27例,女性46例,男性中位年龄8(1~40)岁,女性中位年龄25(1~65)岁。1型28例(38.4%),2型20例(27.4%,包括2A型14例、2B型2例、2M型3例、2N型1例),3型25例(34.2%)。出血表现多以皮肤瘀斑(65.8%)、鼻出血(61.6%)、牙龈出血(46.1%)、术后或外伤后出血难止(15.1%)为主,女性患者中,27例患者出现月经量增多(58.7%)。按照 ISTH-BAT问卷表统计出血积分,43例患者被认为存在异常出血(57.5%)。35例患者进行了替代治疗,4例月经量多的女性患者在替代治疗的基础上联合性激素止血,1例因出血难以控制行子宫切除术。<br> 结论: VWD患者的临床出血表现具有较大异质性,通过自动化检测手段可以提高VWD的临床与试验诊断效率,必要的诊断与分型诊断试验可以对其进行精确的分类,以便予以个体化的治疗。<br> 第三部分22例血管性血友病的基因检测及发病机制研究<br> 目的:采用一代测序(Sanger)和二代测序(NGS)对血管性血友病(VWD)患者进行血管性血友病因子(VWF)基因筛查,比较两种测序方法在VWD基因检测中的优劣性。同时研究其基因型与表型之间的关系,以便进一步探讨 VWD的分子发病机制。<br> 方法:本研究收集了22例VWD患者的外周血标本以及临床和实验室检查资料,所有患者均进行了NGS检测(包含目前已知的与出凝血疾病相关的89种基因),其中11例患者同时采用 Sanger法对 VWF基因进行了测序。<br> 结果:22例患者中,1型VWD4例,2A型VWD1例,2B型VWD2例,2M型VWD3例,3型VWD12例。22例VWD患者中共发现25种VWF基因突变,其中8种为未见报道的新的基因突变。1型和2型VWD患者以杂合突变为主,3型患者主要表现为复合杂合突变。NGS在10例VWD患者中发现了14种VWF基因突变,检出率为91%;Sanger法在7例患者中发现5种VWF基因突变,检出率为64%。除VWF基因外,NGS在10例患者中共检测到与出凝血疾病相关的14种基因的16种突变。<br> 结论:通过对22例VWD患者进行基因筛查,共发现了8种新的VWF基因突变,扩充了我国VWF基因突变数据库。VWF基因突变的检测有助于VWD的诊断与鉴别诊断,有助于更好地理解VWF分子遗传学和相关表型的关系。最后,NGS提供了一个有效的用于分析单个大基因的实验室检测手段,其便捷性、准确性较前大幅提高,对于VWD基因诊断策略的改进具有重要意义。
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