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调控miRNA-150表达对内皮祖细胞在静脉血栓再通中作用的研究

摘要目的:1.明确miR-150在早期内皮祖细胞(eEPCs)及晚期内皮祖细胞(lEPCs)中的表达含量差异;2.明确调控miR-150表达对内皮祖细胞(EPCs)血管形成等生物学功能的作用;3.建立裸大鼠静脉血栓模型后,将调控miR-150表达变化后的eEPCs和lEPCs移植并探讨其对血栓的治疗作用。<br>  方法:1.利用密度梯度离心法从外周血中分离获得单个核细胞,通过EGM-2MV培养基定向诱导培养 EPCs,倒置显微镜下观察 EPCs细胞形态变化情况,应用流式细胞仪、乙酰低密度脂蛋白、荆豆凝集素鉴定细胞,定量PCR测定miR-150在eEPCs及lEPCs中的表达含量。2.将miR-150模拟物、抑制物、对照物通过慢病毒转染到eEPCs和lEPCs。采用荧光显微镜进行慢病毒转染效率分析检测。采用Matrigel生物胶检测调控miR-150表达后的EPCs的在裸鼠体内的成血管能力。3.建立裸大鼠静脉血栓模型,将调控miR-150表达的eEPCs和lEPCs,移植到静脉血栓模型中。移植后7d后,进行造影检查,取出下腔静脉血栓段,进行称重,明确血栓溶解再通情况。<br>  结果:1.离心获得的单个核细胞经过体外诱导分化培养后,2d后细胞开始贴壁,贴壁细胞呈纺锤形,形成散在细胞集落,10~12d后细胞集落逐渐融合,细胞形态呈现鹅卵石样。同时细胞表面表达相应的抗原CD34、CD31、CD133、VEGFR-2、 vWF, Dil-acLDL及FITC-UEA-1双荧光摄取结果显示为双阳性。miR-150在eEPCs及lEPCs中的表达含量不同。2.Matrigel成管实验显示培养的组织内可见管状、网络状的血管样结构,调控miR-150表达后成血管的数量及长度不同。3.利用miR-150模拟物、抑制物、对照物转染eEPCs及lEPCs,上调miR-150可以促进eEPCs的成血管及血栓再通。<br>  结论:miR-150在eEPCs表达含量较lEPCs表达含量低;调控miR-150表达能够影响EPCs成血管及血栓溶解再通能力。

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