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摘要第一部分：血清胱抑素C与急性缺血性脑卒中及脑动脉大血管狭窄的相关性<br>　　目的：研究血清胱抑素C（Cystatin C，CysC）水平与急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke，AIS）发生的关系，进一步分析其与脑动脉大血管狭窄之间的联系。<br>　　方法：收集自2012年1月至2015年12月苏州大学附属第二医院确诊为急性缺血性脑卒中的252例患者的临床资料。所有患者均在发病后7天内进行了脑数字减影血管造影术（digital subtraction angiography，DSA）。脑动脉大血管的定义标准为颈内动脉主干、大脑中动脉M1/M2段和椎动脉V4段。脑动脉大血管狭窄的诊断标准为，经DSA检查证实，相关动脉内腔狭窄≥50％或闭塞。根据动脉狭窄的程度，病例资料分为狭窄组和正常组。另选取体检中心75例无脑卒中病史、无肝肾功能异常、经彩色多普勒超声检查排除颈动脉斑块的健康人群作为对照组。对于服从正态分布及方差齐性的连续变量数据，以均数±标准差来表示，两组间比较采用独立样本的t检验；否则采用秩和检验。使用一般线性回归模型来评估调整其他因素后的 CysC值与脑动脉大血管狭窄情况之间的关系；Bonferroni检验校正多组间均值比较产生的错误；回归分析估算脑动脉大血管狭窄和血清胱抑素C水平之间的关联、优势比（odds ratio，OR）和95％可信区间（confidence interval，CI）。根据血管病变的位置，脑动脉大血管狭窄患者分为4组：椎动脉狭窄组，颈内动脉狭窄组，大脑中动脉狭窄组和多发动脉狭窄组（以上至少2支血管狭窄），比较CysC与血管病变位置的相关性。应用Pearson相关或Spearman秩相关评价AIS患者CysC与临床变量指标之间的相关性。<br>　　结果：纳入研究对象共计252例，包括131例（52.0％）无脑动脉大血管狭窄的患者和121例（48.0％）存在脑动脉大血管狭窄的患者。本研究发现急性缺血性脑卒中组较正常对照人群组CysC水平显著升高（P<0.05）。Logistic回归分析显示，血清 CysC水平的升高是急性缺血性脑卒中患者脑动脉大血管狭窄的独立危险因素。通过线性回归分析表明，即使在调整了年龄、性别、吸烟、高血压、2型糖尿病、血脂异常、同型半胱氨酸和C反应蛋白等混杂因素后，不同狭窄位置的动脉血管间血清CysC的差异无统计学意义（P＞0.05）。本组急性缺血性脑卒中患者中，血清CysC水平与年龄（r=0.427，P＜0.001）、尿素（r=0.256，P＜0.001）、肌酐（r=0.608，P＜0.001）、尿酸（r=0.293，P＜0.001）和C反应蛋白（r=0.193， P=0.002）呈正相关。血清CysC与收缩压（r=0.066，P=0.299）、舒张压（r=-0.021， P=0.741）、空腹血糖（r=-0.081，P=0.198）、甘油三脂（r=-0.001，P=0.991）、总胆固醇（r=-0.009，P=0.889）、高密度脂蛋白（r=-0.084，P=0.185）和低密度脂蛋白（r=0.004，P=0.944）无明显相关性。<br>　　结论：血清 CysC水平的升高与急性缺血性脑卒中的发生相关。在急性缺血性脑卒中组中，血清 CysC水平也与脑动脉大血管狭窄呈显著的正相关关系，血清CysC水平与其动脉狭窄的位置不相关。<br>　　第二部分：外源性胱抑素C对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用<br>　　目的：研究在小鼠脑缺血再灌注损伤24小时后，胱抑素 C(Cystatin C，CysC)在脑部的表达情况；进一步验证外源性CysC对脑缺血再灌注损伤后小鼠神经行为功能、肢体运动和学习能力的改善情况。<br>　　方法：把雄性ICR小鼠随机分为4组：假手术（Sham）组、假手术（Sham）组+胱抑素C（Sham+CysC）组、缺血再灌注（I/R）组、缺血再灌注+胱抑素C（I/R+CysC）组。建立小鼠短暂性大脑中动脉阻塞（ transient middle cerebral artery occlusion， tMCAO）模型，小鼠缺血45 min再灌注24h取损伤部位的脑组织为样本，应用 Western blot法、免疫荧光法监测内源性CysC的表达情况。经侧脑室予以外源性100ng及200ng CysC多肽预处理，缺血45min后行24h再灌注，观察CysC预处理对小鼠脑梗死体积的影响。观察100 ng CysC多肽预处理后，小鼠神经功能缺损及肢体运动功能和学习能力的变化。<br>　　结果：缺血再灌注损伤后24h后，与假手术（Sham）组比，缺血再灌注（I/R）组CysC蛋白的表达水平显著增加（P<0.05）。CysC多肽预处理后，与脑梗死体积百分比为56.18%的I/R组（n=10）相比，I/R+100ng CysC组和I/R+200ng CysC组脑梗死的体积百分比分别减少为32.25%、27.47%，（P<0.05）。CysC预处理后，与I/R组相比，I/R+100ng CysC组神经功能缺损明显改善（P<0.05），小鼠第14天前爪的抓握时间明显延长（P<0.05）,第21天小鼠在水迷宫实验中的逃逸潜伏期明显缩短（P<0.05），神经行为功能及学习记忆能力明显改善。<br>　　结论：与假手术组相比，缺血再灌注组脑组织中内源性CysC的蛋白表达量显著增加（P<0.05）。小鼠tMACO模型中，经侧脑室予以外源性100ng及200ng CysC预处理能明显减少小鼠的脑梗死体积。100ng CysC预处理能显著改善小鼠的神经功能缺损、肢体运动功能和学习能力，提示CysC预处理对小鼠脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。