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摘要目的：<br>　　探索DNA双加氧酶TET1催化结构域（TET1-CD）在肝细胞癌中发挥的去甲基化作用，探讨其在细胞和动物水平上对肝细胞癌的治疗作用。<br>　　方法：<br>　　1.RT-qPCR和Western Blot分别检测LO2细胞和SMMC7721细胞中TET1 mRNA以及蛋白表达水平；<br>　　2.以LO2细胞cDNA为模板，根据TET1基因序列（GenBank:NM_030625）设计上下游引物，获得TET1-CD目的片段，克隆至真核细胞表达载体pflag-CMV4中，构建重组表达质粒pflag-TET1-CD（p-TET1-CD）。采用点突变技术，将TET1蛋白的的1672位组氨酸突变为酪氨酸，1674位的天冬氨酸突变为丙氨酸（H1672Y，D1674A），以pflag-TET1-CD重组质粒为模板，设计上下游突变引物，获得突变重组表达质粒pflag-TET1-mCD（p-TET1-mCD）；<br>　　3.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，亚硫酸氢盐测序法（BSP）检测三组细胞中抑癌基因TET1,P16,SOCS1,APC和RASSF1A以及致癌基因c-Myc,Bmi1,EMS1,Kpna2和c-fos的甲基化水平；<br>　　4.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，RT-qPCR方法检测抑癌基因TET1,P16,SOCS1,APC和RASSF1A以及致癌基因C-Myc,Bmi1,EMS1,Kpna2和c-fos的mRNA表达水平并作比较；<br>　　5.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，CCK8实验检测24h，48h，72h后细胞在OD450nm处的吸光度并做比较；kFluor594 Click-It EDU成像实验检测细胞在转染48h后的DNA增殖情况；<br>　　6.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，细胞划痕、迁移和侵袭实验检测细胞的运动能力并作比较；<br>　　7.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，分别注射到裸鼠皮下建立裸鼠皮下肿瘤模型，定期记录肿瘤体积和重量；免疫组化实验对切片组织中Ki-67蛋白表达进行半定量分析。<br>　　结果：<br>　　1.SMMC7721细胞中TET1 mRNA和蛋白表达水平低于LO2细胞；<br>　　2.重组质粒的测序结果显示目的基因与GenBank上序列一致，突变碱基与预期的吻合；<br>　　3.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，p-TET1-CD组中抑癌基因TET1,P16,SOCS1,APC和RASSF1A的甲基化水平明显低于Control和p-TET1-mCD组；致癌基因C-Myc,Bmi1,EMS1,Kpna2和c-fos的甲基化水平没有明显降低；<br>　　4.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，p-TET1-CD组中抑癌基因TET1,P16,SOCS1,APC和RASSF1A的mRNA表达水平明显高于Control和p-TET1-mCD组；致癌基因中只有c-fos的mRNA表达水平升高有统计学意义；<br>　　5.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，control和p-TET1-mCD组在OD450nm处的吸光度随孵育时间延长而持续增加，而p-TET1-CD组的吸光度增加缓慢；p-TET1-CD组DNA复制能力明显低于control和p-TET1-mCD组；<br>　　6.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，48h后p-TET1-CD组的划痕面积明显大于control和p-TET1-mCD组；细胞迁移和侵袭实验显示与control和p-TET1-mCD组相比，p-TET1-CD组迁移和侵袭的细胞数量明显降低；<br>　　7.Control，p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC7721细胞，建立裸鼠皮下肿瘤模型，p-TET1-CD组的肿瘤体积和重量明显低于control和p-TET1-mCD组；免疫组化结果表明Ki-67蛋白表达受到TET1-CD的抑制。<br>　　结论：<br>　　TET1-CD通过激活高甲基化的APC，p16，RASSF1A，SOCS1和TET1基因，抑制肝细胞癌。