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摘要世界上第一例体外受精(in vitro fertilization，IVF)婴儿Louise Brown自1978年诞生以来，人类辅助生殖技术（assisted reproductive technology,ART）得到了迅速地发展，且该项技术日益成熟，越来越多的婴儿通过这种助孕技术出生。伴随着ART子代的比例在人群中的增加，越来越多的学者展开了有关ART安全性方面的研究，将目光关注于ART的安全性领域。近些年来，辅助生殖技术的研究热点为辅助生殖技术与表观遗传方面的研究。表观遗传修饰在生命现象中普遍存在，是一类特殊的基因调控方式，它对维持哺乳动物的正常生命活动来说至关重要。DNA的甲基化、组蛋白甲基化的修饰以及组蛋白的乙酰化等，均属于表观遗传修饰的方式，同时它们常常对于基因表达的调控起协同作用，并且容易受到多种环境因素的影响，对维持胚胎的正常发育必不可少。胚胎时期表观遗传修饰的异常可能导致胚胎甚至成年后多种疾病的发生。在哺乳动物中间，有一部分特别的基因，它们仅表达单一亲本基因，这种表观遗传的修饰现象称为基因组印记。母系印记基因定义为，某个印记基因来自母本时是缄默的，而相对来自父本时是激活的；当某个印记基因来自父本时是缄默的，而相对来自母本时是激活的，这个基因就称为父系印记基因。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰方式，主要的修饰部位发生在DNA的CpG岛上。印记基因的作用贯穿于胚胎的发生、发展始终。印记基因在配子和胚胎的发育过程中，先后经历了印记的去除、重新建立和印记的维持三个阶段。而辅助生殖技术涉及的各种操作正处于印记基因去除、建立和维持的关键时期。胚胎的表观遗传学修饰是否会因此发生异常？辅助生殖技术涉及的这些操作是否对胎儿的安全性造成影响并引发风险？有待深入研究。<br>　　目的<br>　　为了研究IVF，ICSI(intracytoplasmic sperm injection)，FET（frozen thawed embryo transfer)和体外培养对子代安全性的影响，本研究从遗传印记的角度进行研究，以探讨辅助生殖技术是否会影响父本和母本的印记基因。<br>　　材料与方法<br>　　1.实验材料：研究选取了从2014年1月到2016年12月间，于郑州大学第三附属医院生殖医学中心孕 6w-9w的多胎妊娠患者知情同意而捐赠的因多胎妊娠而行胚胎减灭术之胚胎组织。本研究胚胎组织来源于单一妊娠囊且术前 B 超显示宫内活胎。<br>　　2.方法：我们共收集了 18 例多胎妊娠减胎患者减胎胚胎组织。根据胚胎来源的不同，将其分为6组：经过IVF新鲜移植的D3胚胎（n=3），经过IVF冷冻移植的D3胚胎（n=3），经过IVF冷冻移植的D5胚胎（n=3），经过ICSI新鲜移植的D3胚胎（n=3），经过ICSI冷冻移植的D3胚胎（n=3），单纯控制性促排卵（COS）后的胚胎（n=3）。选择印迹基因H19，IGF2和SNRPN来进行分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）和焦磷酸测序技术检测H19，IGF2，SNRPN的表达水平和在某些CpG位点的DNA甲基化状态。<br>　　3.统计学方法：所有数据均使用IBM SPSS Statistics 23.0进行分析。定量数据以平均值±标准差表示。使用 Kruskal-Wallis H 检验评估六组的结果。P≤0.05为差异有统计学意义。<br>　　结果<br>　　1. 患者临床特征<br>　　本研究共纳入 18 例多胎妊娠减胎患者减胎胚胎组织，具体分组如上所述。各组患者年龄差异无统计学意义（P=0.791），孕龄也无显著性差异（P=0.068）。<br>　　2. 基因表达水平的变化<br>　　采用实时荧光定量聚合酶链式反应的方法在6组间检测印记基因H19，IGF2和SNRPN的mRNA表达水平。结果显示6组间H19，IGF2和SNRPN的基因表达水平差异无统计学意义（H19：P=0.688；IGF2：P=0.527；SNRPN：P=0.295）。<br>　　3. H19，IGF2和SNRPN的DNA甲基化状态<br>　　H19（8个CpG位点），IGF2（5个CpG位点）和SNRPN（9个CpG位点）的平均甲基化百分比在所有组中均无显著性差异（H19：P=0.169; IGF2：P =0.058;SNRPN：P=0.748）。<br>　　结论<br>　　我们的研究结果表明，控制性促排卵后的ART 操作（IVF，ICSI，冷冻保存和体外培养的持续时间）可能不会增加胎儿 H19，IGF2 和 SNRPN的异常表达和某些CpG位点异常DNA甲基化的风险。