检索历史 清除

摘要背景：<br>　　CREPT又被称为RPRD1B或C20ORF77，是新发现的候选癌基因，在多种肿瘤组织中表达，可能参与肿瘤的发生发展过程。然而CREPT对非小细胞肺癌预后的影响及相关生物学机制尚不明确。<br>　　方法：<br>　　本研究通过免疫组化，Western Blot及qRT-PCR等方法检测CREPT、Cyclin D3在非小细胞肺癌组织中的表达并分析了二者表达的相关性。统计分析CREPT的表达水平与342例NSCLC患者临床病理因素间的关系。在此基础上采用Kaplan-Meier 生存分析和Cox风险模型分析探讨CREPT表达与非小细胞肺癌患者预后的关系。通过siRNA干扰A549细胞中CREPT的表达，并使用质粒转染Calu-1细胞构建CREPT高表达稳转细胞系，在体内和体外水平进一步研究CREPT对非小细胞肺癌细胞生物学功能的作用。<br>　　结果：<br>　　1. CREPT在342例NSCLC组织中的阳性表达率为91.5%，在配对癌旁组织中的阳性表达率为39.1%。统计分析显示CREPT在NSCLC组织及其正常组织中的表达差异性显著（p＜0.01）。在NSCLC组织中，CREPT蛋白和mRNA的表达量均高于癌旁组织，差异有统计学意义（p＜0.01）。<br>　　2.CREPT在年龄(p=0.128)、性别(p=0.744)、吸烟史(p=0.811)、病理类型(p=0.826)及肿瘤位置(p=0.124)不同的患者组间表达水平无显著性差异，而CREPT在肿瘤大小(p=0.001)、分化程度(p=0.000)、淋巴结转移(p=0.008)及临床分期(p=0.000) 不同的患者组间表达水平差异显著。<br>　　3. 在mRNA水平和蛋白水平，非小细胞肺癌组织中Cyclin D3的表达均高于癌旁组织。在NSCLC组织中，CREPT和Cyclin D3的表达密切相关( rs=0.527，p=0.000)；CREPT在不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移等病理因素分组中均与Cyclin D3的表达密切相关（p<0.05）。qRT-PCR 和Western Blot结果显示在CREPT高表达细胞中，Cyclin D3的蛋白和mRNA水平明显高于对照组（p＜0.01）；在干扰CREPT表达的NSCLC细胞中，Cyclin D3的蛋白和mRNA水平明显低于对照组（p＜0.01）。<br>　　3. Kaplan-Meier生存分析结果显示CREPT的表达水平越高，非小细胞肺癌患者的RFS(p=0.006)和OS(p=0.01)生存时间越短。通过分层分析显示在鳞癌患者中，CREPT高表达组患者较低表达组患者的生存时间明显缩短(p=0.03)；在腺癌患者中，CREPT高表达组患者较低表达组患者的生存时间无明显差别(p=0.3)。在肿瘤直径＞5cm的患者中，CREPT高表达与患者的不良预后密切相关(p=0.002)；而在肿瘤直径≤5cm的患者中，CREPT高表达组患者较低表达组患者的生存时间无明显差别(p=0.7)。在pTNM III/IV患者中，CREPT高表达患者较低表达患者的生存时间明显缩短(p=0.005)；而在pTNMI/II患者中，CREPT高表达组患者较低表达组患者的生存时间无明显差别(p=0.588)。在淋巴结出现转移(p=0.03)和未转移(p=0.01)的患者中，CREPT高表达均与患者的不良预后密切相关。多因素及单因素分析结果显示CREPT可能是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(HR:1.223, p=0.013)。<br>　　4. 选取Calu-1细胞上调CREPT表达，CCK8实验显示CREPT高表达组的细胞生长速度明显加快(p＜0.01)。流式细胞实验检测细胞分布显示CREPT高表达组较对照组相比，G1期细胞分布比例明显降低( pcDNA3.1-CREPT vs. pcDNA3.1；40.7±1.9%vs.54.5±1.1%)，S期细胞分布比例明显增高(32.3±1.1%vs. 21.4±1.4%)( p<0.05)。划痕实验和Transwell迁移实验显示上调CREPT表达增强Calu-1细胞的迁移能力(p<0.05)。在Transwell侵袭实验，CREPT高表达组的穿膜细胞数量较对照组增多(p<0.05)。<br>　　5. 选取A549细胞干扰CREPT表达，MTT实验显示CREPT高表达组较对照相比，细胞生长速度明显减慢(p＜0.01)。流式细胞实验检测细胞分布显示干扰CREPT表达组与对照组相比，G1期细胞分布比例明显升高( Si-CREPTvs. NC；58.6±4.4%vs 46.3±2.1%)，S期细胞分布比例明显降低(Si-CREPTvs. NC；19.4±1.7%vs.<br>　　27.6±3.3%)( p<0.05)。划痕实验和Transwell迁移实验显示干扰CREPT表达抑制A549细胞的迁移能力(p<0.05)。在Transwell侵袭实验，干扰CREPT表达组的穿膜细胞数量较对照组减少(p<0.05)。<br>　　6. CREPT高表达组的裸鼠移植瘤肿瘤较对照组体积和重量明显增大，生长速度明显加快。在CREPT高表达组的移植瘤组织中，Cyclin D3和Ki67的表达水平较对照组明显升高(p<0.05)。<br>　　结论:<br>　　1. CREPT在非小细胞肺癌组织中较癌旁组织明显升高。CREPT的表达水平与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况密切相关，提示CREPT在非小细胞肺癌的发生发展中发挥重要作用。<br>　　2. 在非小细胞肺癌组织及细胞中，CREPT的表达与Cyclin D3密切相关，提示CREPT可能通过Cyclin D3共同影响非小细胞肺癌的发生发展。<br>　　3. CREPT的表达与非小细胞肺癌患者的不良预后密切相关，分层结果提示CREPT的表达与肿瘤体积较大的进展期鳞癌患者的预后生存时间密切相关，提示CREPT可以更加精确的预测患者预后。Cox回归分析结果提示CREPT可能是影响非小细胞肺癌患者预后的独立因素。<br>　　4. 体外实验中，CREPT通过调控细胞周期增强NSCLC细胞的增殖能力，同时可以增强NSCLC细胞的侵袭和转移能力，进一步印证CREPT可能影响NSCLC的肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移。<br>　　5. 体内实验中，CREPT高表达可以显著促进裸鼠移植瘤的生长，进一步证明CREPT可能通过Cyclin D3调控细胞周期增强NSCLC细胞的增殖能力促进肿瘤生长。<br>　　27.6±3.3%)( p<0.05)。划痕实验和Transwell迁移实验显示干扰CREPT表达抑制A549细胞的迁移能力(p<0.05)。在Transwell侵袭实验，干扰CREPT表达组的穿膜细胞数量较对照组减少(p<0.05)。<br>　　6. CREPT高表达组的裸鼠移植瘤肿瘤较对照组体积和重量明显增大，生长速度明显加快。在CREPT高表达组的移植瘤组织中，Cyclin D3和Ki67的表达水平较对照组明显升高(p<0.05)。<br>　　结论:<br>　　1. CREPT在非小细胞肺癌组织中较癌旁组织明显升高。CREPT的表达水平与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况密切相关，提示CREPT在非小细胞肺癌的发生发展中发挥重要作用。<br>　　2. 在非小细胞肺癌组织及细胞中，CREPT的表达与Cyclin D3密切相关，提示CREPT可能通过Cyclin D3共同影响非小细胞肺癌的发生发展。<br>　　3. CREPT的表达与非小细胞肺癌患者的不良预后密切相关，分层结果提示CREPT的表达与肿瘤体积较大的进展期鳞癌患者的预后生存时间密切相关，提示CREPT可以更加精确的预测患者预后。Cox回归分析结果提示CREPT可能是影响非小细胞肺癌患者预后的独立因素。<br>　　4. 体外实验中，CREPT通过调控细胞周期增强NSCLC细胞的增殖能力，同时可以增强NSCLC细胞的侵袭和转移能力，进一步印证CREPT可能影响NSCLC的肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移。<br>　　5. 体内实验中，CREPT高表达可以显著促进裸鼠移植瘤的生长，进一步证明CREPT可能通过Cyclin D3调控细胞周期增强NSCLC细胞的增殖能力促进肿瘤生长。