换一批摘要胰腺癌是一种高度恶性的消化系肿瘤，其临床表现隐匿，发展迅速，预后极差，成为肿瘤病学的一大挑战。目前胰腺癌的临床发现和诊断基本上是依赖组织成像学及细胞检测方法，难以实现早期诊断。在此背景下，细胞适配体因其高亲和力和高选择性等众多优势而备受关注，CELL-SELEX技术也因其独特的优势得到了快速的发展，为解决上述问题提供了一种新思路。<br> 本工作基于CELL-SELEX技术，以人胰腺癌细胞株PANC-1为靶细胞，以人肺腺癌细胞A549为对照细胞，开展能特异性识别PANC-1的核酸适配体的筛选工作。<br> 主要研究内容包括：<br> 1. 对筛选中涉及的PCR问题进行详细的探讨。本研究主要通过循环数的调整来获得高效且特异性的PCR结果。在筛选前部分都投入大量的模板进行PCR以减少有效序列的遗失，并讨论了不同的PCR情况对筛选的影响。<br> 2. 对进化文库的制备与定量问题进行详细的研究。在进化文库的制备中，针对双链变为单链的过程进行了荧光监控。在进化文库的脱盐处理上，比较了乙醇沉淀法与除盐干燥法的优缺点。在进化文库的定量问题上，针对羧基荧光素FAM荧光强度对pH的敏感性，分别采用了0.2M NaOH和1×BB为背景进行定量，满足了单链分离后的荧光监控和流式表征前文库准确定量的需求。<br> 3. 对获得的核酸适配体群在血浆中的应用开展了筛选方法的创新。通过控制细胞数和文库量，结合孵育时间、洗涤强度等，逐渐增强了正向筛选的压力，经过14轮的筛选初步筛得了胰腺癌细胞PANC-1的高亲和力和特异性的进化文库。在此基础上，引入了两轮HBS的反筛，成功获得了抗HBS干扰的PANC-1核酸适配体群。
更多相关知识
- 浏览9
- 被引1
- 下载2
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
