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摘要Latexin是一个由222个氨基酸组成的分子量约为29kD的蛋白质。它是哺乳动物中唯一已知的羧肽酶抑制剂。目前，国内外对于Latexin的功能大部分集中在神经与发育以及肿瘤相关研究中，而对于炎症方面的研究非常缺乏且机制相当不明确，因此我们以Latexin在肿瘤细胞炎症反应中的作用为切入点进行研究。本论文主要包括以下内容：<br>　　第一章，前言。<br>　　第二章，通过Western Blot、免疫组织化学和细胞免疫荧光技术，分析了Latexin在体外培养细胞系和体内不同组织的分布与表达规律。<br>　　第三章，通过蛋白质组学策略，进行Latexin蛋白质复合物的鉴定，并运用免疫沉淀及细胞免疫荧光技术，验证相互作用蛋白。<br>　　第四章，Latexin抗炎机制研究。通过双萤光素酶报告基因系统和qRT-PCR，我们发现Latexin过表达抑制NF-κB-Luc活性以及抑制TNF-α诱导的炎症因子表达(如ICAM1、VCAM1、IL-6等)，表明Latexin可以抑制炎症反应；通过细胞免疫荧光和EMSA实验，发现Latexin抑制TNF-α诱导的p65核转移及DNA binding活性；由于p65核转移受IκBα调控，通过在细胞中转染Latexin过表达质粒或siRNA,发现过表达Latexin延长IκBα的半衰期，并抑制基础水平及TNF-α诱导的IκBα降解；在NF-κB信号通路中IκBα的降解主要由泛素化途径完成，通过免疫共沉淀实验，发现过表达Latexin抑制IκBα泛素化，敲低Latexin促进IκBα泛素化。有意思的是，我们发现TNF-α诱导IκBα泛素化的同时，IκBα和RPS3的相互作用增强；而过表达Latexin后，IκBα的泛素化被部分抑制，并伴随IκBα和RPS3的相互作用减弱，提示RPS3可能介导IκBα的泛素化。为了进一步探究Latexin影响IκBα泛素化的具体机制，我们利用免疫共沉淀并结合质谱技术筛选到了与Latexin相互作用的蛋白HECTD1，HECTD1是一个E3泛素连接酶。进一步通过免疫共沉淀和Western Blot技术，我们验证了HECTD1和Latexin以及RPS3相互作用，组成复合物。通过在细胞中敲低HECTD1和RPS3，发现IκBα的泛素化受到抑制；敲低RPS3后，HECTD1与IκBα的相互作用减弱，进一步明确了HECTD1和RPS3共同参与IκBα的泛素化。文献报道Latexin的基因表达调控区域具有数个维甲酸反应元件，我们的实验也证明维甲酸诱导Latexin表达升高，同时HECTD1表达受到抑制。通过在细胞中敲低Latexin，并用维甲酸处理，发现IκBα泛素化的抑制作用被减弱，并逆转维甲酸对TNF-α诱导炎症因子表达的抑制作用，表明Latexin介导了维甲酸的抗炎症过程。<br>　　因此，在本研究中我们发现并证明了Latexin抑制TNF-α诱导的炎症反应的新机制：<br>　　1)Latexin抑制IκBα的泛素化;<br>　　2)Latexin、HECTD1及RPS3形成蛋白质复合物，并且Latexin下调HECTD1的表达;<br>　　3)HECTD1及RPS3参与IκBα的泛素化;<br>　　4)Latexin介导了维甲酸的抗炎作用。<br>　　总之，本研究主要集中探讨了Latexin和HECTD1相互作用来调控炎症反应，阐明了Latexin参与炎症反应的新机制，为明确Latexin蛋白在炎症反应中的作用提供理论依据。